貴州及周邊地區(qū)斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素抗肝癌活性及對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、目的：初步分析貴州及周邊不同地理種群斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的含量，篩選出抗肝癌活性顯著的地理種群，并進行對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究，為后續(xù)優(yōu)良地理種群斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的開發(fā)利用提供科研基礎(chǔ)。
　　方法：1、水提法提取的斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素,運用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）分析結(jié)合斑蝥素含量；2、采用磺酰羅丹明染色法(SRB法)檢測結(jié)合斑蝥素對肝癌HepG2細(xì)胞的體外抗腫瘤活性，篩選出抗肝癌活性較高3-4種優(yōu)良地理種群；3、

2、應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察結(jié)合斑蝥素對人肝癌 HepG2細(xì)胞形態(tài)的影響；4、Annexin V-FITC/PI雙染法檢測結(jié)合斑蝥素對人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響；5、采用PI標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的變化；6、透射電子顯微鏡觀察結(jié)合斑蝥素作用人肝癌 HepG2細(xì)胞后超微結(jié)構(gòu)的變化；7、Western blotting法檢測結(jié)合斑蝥素對 HepG2細(xì)胞中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：1、貴州省羅甸縣城區(qū)南方大

3、斑蝥結(jié)合斑蝥素（BCMP）與黃黑小斑蝥結(jié)合斑蝥素（BCML）含量高于其它地理種群同種斑蝥，分別為375 mg·L﹣1和290 mg·L﹣1，茂丼鎮(zhèn)境內(nèi)的BCMP和BCML含量其次，分別為262mg·L﹣1和199 mg·L﹣1；2、不同地理種群的斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素對人肝癌 HepG2細(xì)胞的增殖均有抑制作用，其中茂丼鎮(zhèn)境內(nèi)的BCMP和BCML對肝癌HepG2細(xì)胞的抑制活性明顯優(yōu)于其它地理種群同種斑蝥，其半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為0.7

4、8 mg·L﹣1和0.65mg·L﹣1，羅甸縣城區(qū)境內(nèi)的BCMP和 BCML對 HepG2細(xì)胞的抑制活性其次，其半數(shù)抑制濃度分別為0.88mg·L﹣1和0.86mg·L﹣1；3、倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果，羅甸城區(qū)和茂丼鎮(zhèn)兩地理種群斑蝥結(jié)合斑蝥素均可造成癌細(xì)胞數(shù)目的逐漸減少，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，并出現(xiàn)固縮、體積變小現(xiàn)象；4、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組比較，茂丼鎮(zhèn) BCMP和 BCML對 HepG2細(xì)胞的凋亡率從24h的9.77±1.33％和1

5、0.27±1.44%分別增加到48h的22.16±1.35%和22.33±1.11%(P＜0.05)；羅甸城區(qū)BCMP和BCML對細(xì)胞的凋亡率從24h的7.60±1.05%和8.17±0.50%分別增加到48h的18.70±2.26和18.87±2.50（P＜0.05）；5、細(xì)胞周期結(jié)果示，與對照組比較，茂丼鎮(zhèn)BCMP和BCML可使S期細(xì)胞比率下降，G2/M期細(xì)胞比率明顯增加，出現(xiàn)G2/M期阻滯；羅甸城區(qū)BCMP和BCML可使S期細(xì)胞比

6、率下降，G0/G1期細(xì)胞比率明顯增加， G2/M期細(xì)胞比率亦有增加，主要出現(xiàn) G0/G1期阻滯。6、透射電鏡觀察示，羅甸城區(qū)和茂丼鎮(zhèn)兩地理種群斑蝥結(jié)合斑蝥素可致 HepG2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體的腫脹，隨著作用時間的延長，超微結(jié)構(gòu)變化更明顯。7、Western blotting結(jié)果示，與對照組相比，茂丼鎮(zhèn)兩種斑蝥結(jié)合斑蝥素組均可造成Bax蛋白表達(dá)水平的升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平下降。
　　結(jié)論：
　　1、斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的含