血管緊張素Ⅱ?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞生物學(xué)行為及HIF-1α表達(dá)的影響.pdf

1、目的:(1)探討血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及血管緊張素Ⅱ1型受體(angiotensinⅡtype1receptor,ATlR)拮抗劑對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞生物學(xué)行為及缺氧誘生因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)表達(dá)的影響。(2)研究ATlR拮抗劑對(duì)裸鼠人 HepG2原位肝癌模型腫瘤組織中HIF-1α表達(dá)的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞。

2、24 h后以不同濃度(10-8～10-6mol/L)的AngⅡ和ATlR拮抗劑坎地沙坦分別處理，每12h取出一組采用CCK-8法檢測(cè)AngⅡ?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞增殖的影響，直至第60h。24h后用Transwell法檢測(cè)人肝癌HepG2細(xì)胞侵襲能力，用細(xì)胞同質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人肝癌HepG2細(xì)胞黏附能力，用ELISA法檢測(cè)人肝癌HepG2細(xì)胞HIF-1α的表達(dá)水平。構(gòu)建穩(wěn)定的人肝癌HepG2細(xì)胞裸鼠模型，將符合實(shí)驗(yàn)要求的成功模型按照隨機(jī)法

3、分為5組，空白對(duì)照組(0.9%NaCl)、坎地沙坦低劑量組(5mg/kg/d)、坎地沙坦中劑量組(10mg/kg/d)、坎地沙坦高劑量組(20mg/kg/d)及5-FU組(25mg/kg/d)。連續(xù)喂養(yǎng)2周，第15天處死裸鼠，剝離腫瘤組織。應(yīng)用RNA提取試劑盒提取腫瘤組織RNA，應(yīng)用 RT-PCR法檢測(cè)各組腫瘤標(biāo)本HIF-1αmRNA的表達(dá)差異。提取腫瘤組織總蛋白，應(yīng)用Western Blot法檢測(cè)各組腫瘤組織HIF-1α蛋白的表達(dá)水平

4、。
　　結(jié)果:AngⅡ能提高人肝癌HepG2細(xì)胞增殖能力，且藥物作用隨著作用時(shí)間及作用濃度的增加而增強(qiáng)，當(dāng)AngII作用濃度為10-7mo1/L，作用時(shí)間為48h時(shí)，促增殖作用達(dá)到最高峰，且該作用可以被坎地沙坦所拮抗。AngⅡ亦能促進(jìn)人肝癌HepG2細(xì)胞侵襲能力、黏附能力及HIF-1α的表達(dá)，并隨著AngII濃度的提高肝癌細(xì)胞上述指標(biāo)均增高，在Ang II濃度為10-7mol/L時(shí)，肝癌細(xì)胞上述指標(biāo)達(dá)到最高峰，然而AngII濃度進(jìn)

5、一步增高至10-6mol/L，肝癌細(xì)胞上述指標(biāo)與10-7mol/L相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但與對(duì)照組相比，差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。坎地沙坦可以阻斷上述作用，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RT-PCR和Western Blot分析顯示，隨坎地沙坦灌胃劑量的增高，裸鼠腫瘤組織中HIF-1αmRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行性降低，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，坎地沙坦低劑量組與5-FU組相比較，表達(dá)量