Notch1表達失調對肝癌細胞HepG2生物學行為的影響.pdf

1、目的：Notch信號通路在腫瘤扮演癌基因或抑癌基因作用，但其在肝癌中的作用存在爭論。本實驗探討Notch1-Hes1/Hes2信號通路對肝癌細胞HepG2增殖能力、細胞周期、遷移侵襲能力的影響。
　　 方法：用脂質體轉染法分別用含有Notch1胞內段質粒與Notch1干擾RNA轉染肝癌細胞HepG2，篩選出穩(wěn)定的細胞系Notch1過表達細胞、空載體組細胞、Notch1干擾組細胞。MTT比色測定各組細胞增殖能力;流式細胞儀測定各組

2、細胞細胞周期;Transwell檢測細胞遷移能力;Matrigel侵襲實驗檢測細胞侵襲能力;用RT-PCR檢測Notch1、Hes1和Hes2基因的表達;Western印跡法檢測Notch1、Hes1和Hes2蛋白的表達。
　　 結果：RT-PCR測定Notch1mRNA水平和Western測定Notch1蛋白表達水平結果表明我們成功轉染并篩選出穩(wěn)定細胞系Notch1過表達細胞、空載體組細胞、Notch1干擾組細胞;MTT結果顯

3、示Notch1過表達組細胞相對空載體組及未處理組的細胞增殖能力顯著減弱;而干擾組的細胞相對空載體組及未處理組細胞增殖能力明顯增強;流式細胞儀結果顯示Notch1過表達組相對空載體組及未處理組在G1期細胞明顯增多;干擾組相對于對照組在G1期的細胞明顯減少。遷移侵襲實驗結果顯示過表達組相對于空載體組及未處理組遷移侵襲能力減弱;而干擾組相對于對照組遷移侵襲能力增強。RT-PCR及Westernblot實驗結果顯示過表達組相對于空載體組及未處理