去甲基化制劑誘導HepG2肝癌細胞RUNX3基因表達及對生物學行為和藥物敏感性的影響.pdf

1、目的：RUNX3(PEBP2aC/CBFA3/AML2)為新近克隆的一個候選抑癌基因。研究表明該基因在人類多種腫瘤中存在甲基化異常，而肝癌中該基因的表達情況尚處于探索階段。本研究觀察去甲基化制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR)誘導人肝癌細胞系HepG2因高甲基化失活的RUNX3基因的再表達及對該腫瘤細胞生物學行為和藥物敏感性的影響。 方法：以不表達RUNX3基因的人肝癌

2、細胞系HepG2為靶細胞，分為不加任何處理的對照組和5-Aza-CdR處理組。應用逆轉錄．聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測抑癌基因RUNX3 mRNA表達水平的改變；MTT比色法觀察細胞的生長活性及對化療藥物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)和阿霉素(adriamycin，ADM)IC<,50>值的影響；平板克隆試驗檢測細胞對5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)的敏感性；流式細胞儀(FCM)測定細

3、胞周期及阿霉素(adriamycin，ADM)累積率；透射電鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)學變化。 結果：對照組HepG2細胞未能檢RUNX3基因mRNA表達，而經0.1、5.0gmol/L5-Aza-CdR處理后，RUNX3 mRNA可見再表達。5-Aza-CdR可時間、濃度依賴性地抑制HepG2細胞增殖(P<0.05)，相關系數(γ)別為γ 24h=0.894，γ 48h=0.973，γ 72h=0.967，24、48和 72 h的I

4、C<,50>分別為87.5、84.7和59.0μmol/L。經5-Aza-CdR處理后，電鏡顯示HepG2細胞為早期凋亡形態(tài)學改變。分別采用為5.0和10.0μmol/L濃度的5-Aza-CdR處理HepG2細胞72 h，與對照組相比，其S期細胞增多，而G<,1>期細胞減少，提示細胞發(fā)生S期阻滯。MTT試驗顯示5-Aza-CdR處理組細胞5-FU及阿霉素的IC<,50>比對照組明顯降低(P<0.05)，且前者的胞內阿霉索熒光強度顯著高于