植物內(nèi)源小RNA隨機過表達體系的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、小RNA是真核生物中一類非常保守的生長發(fā)育調(diào)節(jié)分子，對植物的器官發(fā)生、極性生長、細胞增殖、組織分化以及抵抗外界不良環(huán)境等方面都具有重要的調(diào)控作用。擬南芥作為第一個被完成基因組測序的開花植物，由于其基因組緊湊、生育期短、易于人工培養(yǎng)和遺傳操作等特點，成為單子葉、雙子葉植物基因功能和生長發(fā)育研究的理想模式材料。擬南芥基因組中具有大量的小RNA，研究這些小RNA的生物學功能對了解植物發(fā)育和分子育種至關重要。目前雖然可以通過人工微小RNA及合成

2、小RNA技術對特定小RNA進行過量表達，但這些技術每次只能對單一小RNA分子進行遺傳操作，這嚴重限制了對大量植物內(nèi)源小RNA的功能研究和應用。本研究通過對本實驗室原有的tasiRNA表達載體進行改造，建立一種新的功能基因組學研究系統(tǒng)，將擬南芥內(nèi)各種不同小RNA隨機過量表達;并通過構建小RNA過表達突變體庫，對各種小RNA的生物學功能、作用機制和靶基因進行研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在原有tasiRNA表達載體pRDE-0的基

3、礎上，將pRDE-0的35S啟動子35s替換成玉米Ubi啟動子，構建新的tasiRNA表達載體pRDE。⑵通過合成三個報告基因CHLORINA42（Ch42）、Trich、 FLOWERING LOCUST(Ft)的寡聚核苷酸鏈，退火形成DNA雙鏈，與酶切后載體pRDE連接，構建成三個含報告基因的載體:pRDE-Ch42、pRDE-Trich、pRDE-Ft,通過農(nóng)桿菌介導的花序侵染法轉化擬南芥，篩選出pRDE-Ch42、pRDE-Tr

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