L-Wnt3a細(xì)胞及其條件培養(yǎng)基支持小鼠胚胎干細(xì)胞的增殖與分化.pdf

1、小鼠胎兒成纖維細(xì)胞經(jīng)常作為飼養(yǎng)層細(xì)胞用于胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)。然而，使用胎兒成纖維細(xì)胞作飼養(yǎng)層受到細(xì)胞代次等因素限制，并且，制備小鼠胎兒成纖維細(xì)胞要消耗大量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。L-Wnt3a細(xì)胞是一種經(jīng)遺傳修飾的小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞，它能夠穩(wěn)定分泌Wnt3A蛋白。目前，還不清楚該細(xì)胞是否適合作為小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細(xì)胞。本研究，使用絲裂霉素C處理L-Wnt3a細(xì)胞，并在MTT法的基礎(chǔ)上測(cè)定處理后L-Wnt3a細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，將處理后的細(xì)胞用于

2、小鼠胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)，并且獲得了該細(xì)胞的條件培養(yǎng)基，進(jìn)一步探討了其在無(wú)飼養(yǎng)層條件下對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞的作用。結(jié)果顯示，L-Wnt3a細(xì)胞在10μg/ml絲裂霉素C處理4h后，細(xì)胞的生長(zhǎng)受到了顯著的抑制，但細(xì)胞的活力狀態(tài)不受影響。用處理過(guò)的L-Wnt3a細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，成功建立小鼠胚胎干細(xì)胞系。用L-Wnt3a細(xì)胞的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)ES細(xì)胞時(shí)，小鼠胚胎干細(xì)胞在無(wú)飼養(yǎng)層條件下自我增殖能力良好，該條件下培養(yǎng)的ES細(xì)胞表達(dá)堿性磷酸酶、Oct4、