小鼠與豬胚胎干細(xì)胞分離培養(yǎng).pdf

1、胚胎干細(xì)胞是一類具有在體外無(wú)限自我復(fù)制和分化為體內(nèi)任何種類細(xì)胞的多潛能細(xì)胞。目前，公認(rèn)的胚胎干細(xì)胞全能性判斷標(biāo)準(zhǔn)包括：體內(nèi)、體外向三胚層細(xì)胞分化和二倍體嵌合后能進(jìn)入生殖脊。從1981年KaufmanMH等第一次分離小鼠胚胎干細(xì)胞至今，能滿足這些標(biāo)準(zhǔn)的只有小鼠、大鼠和雞的胚胎干細(xì)胞系。豬是重要的人類疾病模型動(dòng)物、藥物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣?dòng)物，同時(shí)還是人類異種器官移植的主要候選供體，其胚胎干細(xì)胞系的建立也一直受到廣泛的關(guān)注，但是迄今為止真正的豬胚胎干細(xì)

2、胞系（即滿足上述判定標(biāo)準(zhǔn)）還未被建立起來(lái)。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先采用改進(jìn)的方法建立了小鼠胚胎干細(xì)胞系，然后以小鼠胚胎干細(xì)胞系建立的技術(shù)體系為基礎(chǔ)，通過(guò)對(duì)豬早期胚胎發(fā)育的研究，對(duì)豬胚胎干細(xì)胞的建系技術(shù)以及分離得到真正豬胚胎干細(xì)胞的可能性等問(wèn)題進(jìn)行了探討。主要的實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 第一部分用KOSR胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液與FBS胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液結(jié)合的方式進(jìn)行了ICR品系小鼠ESC的分離建系。結(jié)果表明，這種改進(jìn)的建系方法不但

3、可以用ICR品系小鼠的囊胚分離胚胎干細(xì)胞系，而且建系的效率高達(dá)71.4％。我們對(duì)得到的胚胎干細(xì)胞系中的一株進(jìn)行了多能性的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明該細(xì)胞系滿足小鼠胚胎干細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。
　　 第二部分我們對(duì)豬早期胚胎進(jìn)行了收集、形態(tài)觀察、直徑測(cè)量等實(shí)驗(yàn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，我們收集了關(guān)于豬早期胚胎發(fā)育的一些數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，豬早期胚胎的胎齡和其直徑大小具有正相關(guān)的聯(lián)系；同一批次的胚胎之間發(fā)育不同步的現(xiàn)象比較普遍，所以用胎齡對(duì)豬早期胚胎進(jìn)行籠統(tǒng)的