融安金柑組織培養(yǎng)再生體系建立與優(yōu)化.pdf

1、金柑（Fortunella crassifolia Swingle）為蕓香科柑桔亞科金柑屬植物，其童期比較短，實(shí)生繁殖后約一年便可開(kāi)花結(jié)實(shí)，是進(jìn)行木本植物相關(guān)基因功能驗(yàn)證的良好研究材料，特別是對(duì)花發(fā)育和果實(shí)性狀相關(guān)基因功能研究的優(yōu)良轉(zhuǎn)基因研究材料。金柑組織培養(yǎng)或再生體系已有研究，但未見(jiàn)有融安金柑組織培養(yǎng)高效再生體系建立與優(yōu)化的報(bào)道。本研究以融安金柑為試材，篩選誘導(dǎo)形成愈傷組織及再生不定芽最高的最佳外植體;各階段培養(yǎng)中生長(zhǎng)激素與細(xì)胞分裂素

2、的濃度配比;建立了一套高效、快速的金柑組織培養(yǎng)再生體系，為后續(xù)金柑相關(guān)基因功能驗(yàn)證及相關(guān)分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)論如下:
　　1.種子播種培養(yǎng)無(wú)菌苗試驗(yàn)中，種子用0.1％升汞消毒8min滅菌效果最好，種子在MT培養(yǎng)基培養(yǎng)萌發(fā)率高于MS培養(yǎng)基;剝?nèi)?nèi)外種皮的種子接入添加2.0 mg/L GA3的MT培養(yǎng)基中，溫度24±2℃，空氣相對(duì)濕度60％，暗培養(yǎng)15d后，萌發(fā)率93.67％，芽長(zhǎng)6.45 cm，根長(zhǎng)4.23 cm。

3、　　2.誘導(dǎo)愈傷組織及再生不定芽試驗(yàn)中，以上胚軸為外植體的誘導(dǎo)率最高，培養(yǎng)30d，誘導(dǎo)率達(dá)100％。上胚軸誘導(dǎo)形成愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MT+6-BA2.00mg/L+NAA1.00 mg/L+糖30 g/L+瓊脂8g/L，培養(yǎng)20 d，成愈率97.67％;上胚軸直接誘導(dǎo)不定芽最佳激素配比為6-BA3.00 mg/L和NAA0.50 mg/L;誘導(dǎo)30d左右平均不定芽個(gè)數(shù)達(dá)11.90個(gè)。愈傷組織誘導(dǎo)不定芽最佳激素配比為6-BA2.00mg

4、/L和NAA1.00 mg/L;平均不定芽個(gè)數(shù)達(dá)8.80個(gè)。莖段誘導(dǎo)出芽的最佳激素配比為6-BA3.00 mg/L和NAA0.50 mg/L，培養(yǎng)15 d出芽率達(dá)48.33％，不定芽個(gè)數(shù)2.26個(gè)。
　　3.芽增殖試驗(yàn)中，無(wú)菌芽增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MT基本培養(yǎng)基+6-BA1.00mg/L+ NAA0.40 mg/L+5.00％椰汁+糖30 g/L+瓊脂8 g/L，約20 d增殖倍數(shù)達(dá)15.11;無(wú)菌芽長(zhǎng)勢(shì)較好，葉片濃綠，芽健壯。<