制藥廢水優(yōu)勢菌株的篩選及關鍵β-內酰胺酶的應用.pdf

1、隨著醫(yī)藥行業(yè)的迅速發(fā)展，給人類帶來好處的同時也衍生出了一系列問題，例如制藥廢水隨意排放問題，其影響著人類生態(tài)環(huán)境和身體健康。其中，尤其是抗生素廢水的排放，因工廠在抗生素制備過程中，原材料利用率低，抗生素制備率低，導致工廠排放的廢水具有抗生素含量高，毒性大，顏色深，可生化性差，化學需氧量高等特點。雖然目前處理此類廢水的方法有許多，這些方法有些能夠對污染物進行吸附、沉淀；有些能夠降解小分子物質。但吸附沉淀的方法并沒有真正涉及到物質的降解，而

2、化學方法雖能夠水解小分子物質，但會產(chǎn)生二次污染，并且成本比較高，因此，尋找一種既經(jīng)濟、又環(huán)境友好型的方法對制藥廢水進行處理就顯得尤為重要。
　　生物酶法處理技術是利用廢水中的有機物作為惟一的碳源和氮源，利用微生物對廢水進行降解的技術。它具有處理廢水量大、操作簡單、處理設備成本低、無二次污染以及對環(huán)境友好等特點，尤其對小分子有機物有良好的降解效果。所以選擇生物酶法處理抗生素廢水可能是既有效、又環(huán)境友好型的一種方法。
　　本文以

3、廢水中優(yōu)勢菌株的β-內酰胺酶為研究對象，采用生物處理技術，以降低廢水化學需氧量為目標，主要研究了廢水中優(yōu)勢菌株的藥物敏感性，β-內酰胺酶的酶學性質，交聯(lián)酶聚集體固定化方法的制備工藝以及用固定化酶對廢水化學需氧量的處理。
　　其主要研究成果包括：
　　1)以制藥廢水中的有機物作為唯一碳源，從中篩選并鑒定出了2個生長優(yōu)勢菌株，他們分別是鮑曼不動桿菌和變形桿菌。
　　2)通過抗生素藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，這兩個菌株對高濃度的氨芐青霉素

4、耐藥，且都具有超廣譜β-內酰胺酶。
　　3)我們克隆并合成了β-內酰胺酶基因，隨后對其進行誘導表達，最優(yōu)的誘導表達條件為：菌液接種量2％，Amp濃度100μg/mL，在溫度為37℃，轉速180 rpm的搖床中搖菌至OD600為0.6-0.8后，16℃靜置1.5 h，加入阿拉伯糖0.05 mg/mL，誘導溫度改為16℃，轉速改為100 rpm，誘導10小時，可獲得可溶性目的蛋白。
　　4）我們用交聯(lián)酶聚集體固定化方法對β-內酰

5、胺酶進行了固定，固定化酶回收率可達94.5%；并且在70℃高溫環(huán)境下6小時仍能保留70%的酶活；在4℃環(huán)境下保存2周仍有90%的酶活性，而游離酶在60℃高溫環(huán)境下兩個小時后酶活全部喪失，并且在4℃環(huán)境下保存30小時酶活全部喪失，因此我們可以說獲得了穩(wěn)定性高，易回收，可重復使用的酶蛋白。并且得到了最優(yōu)的固定化條件：即25 mg/mL的粗酶液1 mL，加入1/3酶量（W/W）的BSA充當保護劑，5 mL75%的硫酸銨溶液沉淀，終濃度0.5%