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文檔簡介
1、Hedgehog(HH)信號通路是一條相對比較保守的信號通路，在生物的形態(tài)發(fā)生及胚胎形成中起重要作用。在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，Glis家族共有三個成員，Glil是HH信號通路中最主要的轉(zhuǎn)錄因子。
糖皮質(zhì)激素受體相互作用蛋白1(Glucocorticoid receptor-interacting protein1，GRIP1)，是類固醇受體輔激活因子(SRC)家族成員之一，可以輔助多種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合啟動子進(jìn)而激活基因轉(zhuǎn)錄。
2、本文的研究重點(diǎn)是通過熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)確定GRIP1能夠增強(qiáng)Gli1的轉(zhuǎn)錄活性，并進(jìn)一步研究GRIP1能夠增強(qiáng)Gli1的轉(zhuǎn)錄活性的具體機(jī)制。主要內(nèi)容包括:
(1)首先在不同細(xì)胞系中，通過熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)確定SRC家族(SRC-1、GRIP1和AIB1)中，只有GRIP1能特異性地增強(qiáng)Gli1的轉(zhuǎn)錄活性。同時證明GRIP1氨基酸序列的1011-1464片段是增強(qiáng)Gli1的轉(zhuǎn)錄活性所必需的。
(2)隨后研究GRIP
3、1與Glil蛋白之間的關(guān)系，通過哺乳動物細(xì)胞雙雜交實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)GRIP1與Glil之間存在相互作用，之后通過細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GRIP1和Gli1在細(xì)胞核內(nèi)共定位。
(3)最后研究GRIP1與Gli1相互作用的區(qū)域，通過哺乳動物細(xì)胞雙雜交試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Gli1的407-1020區(qū)域是GRIP1與Gli1相互作用必需的片段，同時研究GRIP1的1011-1464區(qū)域是GRIP1與Gli1(407-1020)相互作用必需的，通過免疫共
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