轉kap6.1pcdna3.12s綿羊成纖維細胞株的建立

1、學校代碼：1 0 2 2 5學 號：S 1 4 5 6 5學位論文轉K a p 6 ．卜p c D N A 3 ．卜2 S 綿羊成纖維細胞株的建立指導教師姓名：申請學位級別：論文提交日期：授予學位單位：詹俐楠安鐵洙教授碩士2 0 1 4 年4 月東北林業(yè)大學東北林業(yè)大學學科專業(yè)： 發(fā)育生物學論文答辯日期： 2 0 1 4 年6 月授予學位日期： 2 0 1 4 年6 月答辯委員會主席：論文評閱人：聾夕厶櫛素大學轉K 印6 ．1 - p

2、c D N A 3 ．1 —2 S 綿羊成纖維細胞株的建立摘要蜘蛛絲具有無可比擬的優(yōu)良性能，是具有分層結構的復合材料。關于蜘蛛絲蛋白的研究，一直以來都是科學研究者們關注的重點。由于蜘蛛高度的領土意識及侵略性，使得人工飼養(yǎng)蜘蛛具有一定的困難。本研究利用羊毛中的角蛋白相關蛋白基因＆叫5 ．1 作為啟動子，將其與帶有n e o 抗性的p c D N A 3 ．1 相連接構建真核表達載體，再利用本實驗室前期合成的蜘蛛拖絲蛋白二聚體2 S 與其相

3、連，構建可以啟動蜘蛛拖絲蛋白的真核表達載體并轉染綿羊皮膚成纖維細胞，經G 馮1 8 篩選出陽性細胞并擴大培養(yǎng)，建立轉蜘蛛拖絲蛋白二聚體的綿羊皮膚成纖維細胞株，并為后續(xù)實驗生產轉基因綿羊奠定基礎。研究結果與結論如下：1 、真核表達載體的構建：雙酶酶切去除p c D N A 3 ．1 自身的自啟動子C M V ，以同樣的一對酶對＆嘶．1 進行酶切并與p c D i №夠．1 相連接，再與蜘蛛拖絲蛋白二聚體2 S 相連，成功構建真核表達載體K

4、 a p 6 ．1 ．p c D N A 3 ．1 ．2 S 。2 、綿羊皮膚成纖維細胞的轉染與篩選：將＆I p 6 ．1 - p c D N A 3 ．1 - 2 S 線性化后，用脂質體法轉染綿羊皮膚成纖維細胞，使用最適濃度的G 4 1 8 進行篩選，獲得具有n e o 抗性的轉基因陽性細胞。3 、轉基因陽性細胞的檢測：對獲得的轉基因陽性細胞提取其基因組D N A ，采用P C R方法進行檢測，結果表明線性化K a p 6 ．1 ．p