端粒酶催化亞單位啟動子(htertp)調(diào)控胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因(tk)靶向性殺傷鼻咽癌細胞中cd13339;細胞的實驗研究

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文端粒酶催化亞單位啟動子（hTERTp）調(diào)控胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因（TK）靶向性殺傷鼻咽癌細胞中CD133細胞的實驗研究姓名：關(guān)小芳申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉-頭頸外科學指導教師：文忠20090418中文摘要富集了腫瘤干細胞，因而稱之為腦腫瘤干細胞球。另外，國外有研究表明，腫瘤干細胞中具有較高的端粒酶活性，腫瘤干細胞與端粒酶系統(tǒng)之間的密切關(guān)系可以解釋腫瘤干細胞的無限增殖潛能及其惡性轉(zhuǎn)化潛能，即端粒酶高活性可

2、能是支撐腫瘤干細胞惡性轉(zhuǎn)化的“動力源泉”，這為我們深入研究提供了切入點。到目前為止，研究鼻咽癌細胞系中腫瘤干細胞的報道不多。因此，本實驗選取一株人鼻咽癌S U N E 細胞系，試圖通過腫瘤干細胞特異的表面標記C D l 3 3 ，采用免疫磁珠分選的方法分離腫瘤干細胞，用特殊的含生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)鼻咽癌干細胞，并根據(jù)腫瘤干細胞特有的能夠自我更新和不定向分化能力對其進行鑒定，同時檢測其端粒酶活性，最后將我們已構(gòu)建的h T E R T

3、 啟動子調(diào)控T K 自殺基因的特異性表達載體( h T E R T ／T K ／p G L 3 ) ，轉(zhuǎn)染經(jīng)免疫磁珠分選并證實的鼻咽癌干細胞中，探討以上特異表達載體對鼻咽癌干細胞的靶向殺滅作用以及對其端粒酶系統(tǒng)活性的改變。研究目的研究C D l 3 3 在人鼻咽癌細胞株S U N E 中的表達，檢測C D l 3 3 + 腫瘤細胞體外增殖分化情況，對其進行腫瘤干細胞的鑒定；探討端粒酶催化亞單位啟動子／胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因( h T

4、E R T p ／T K ) 腫瘤特異表達系統(tǒng)，對鼻咽癌細胞株S U N E 中鼻咽癌干細胞端粒酶活性的影響及靶向性殺傷作用。實驗方法1 、S U N E 細胞株的培養(yǎng)：鼻咽癌細胞株S U N E 培養(yǎng)在含1 0 ％新生牛血清的R P M I1 6 4 0 完全培養(yǎng)液中，置于5 ％C 0 2 、3 7 “ ( 2 飽和溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞生長到鋪滿培養(yǎng)瓶底8 0 ％時按1 ：2 或1 ：3 傳代培養(yǎng)。2 、流式細胞儀檢測S U N

5、 E 細胞中C D l 3 3 的表達：計數(shù)約1 0 7 的S U N E 細胞，經(jīng)胰酶消化處理、0 ．0 1 ％P B S 洗滌，去上清、加入藻紅蛋白( p h y c o e r y t h r i m ，P E )標記的．C D l 3 3 抗體1 0 I ．t L 、F c R 阻斷劑2 0 I _ t L 、b u f f e r 8 0 I - t L ，充分混勻后避光4 “ C冷卻1 0 m i n ，b u f f e