溴氨酸脫色酶特性研究.pdf

1、溴氨酸是一種重要的蒽醌染料中間體，由于溴氨酸的水溶性好，且位于蒽醌結(jié)構(gòu)兩邊的苯環(huán)同時受到兩個羰基影響，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，難被普通微生物降解，因此，在環(huán)境中有較長的停留期。研究溴氨酸的脫色酶及降解機理對了解蒽醌染料的降解機理及廣泛開展蒽醌化合物的微生物降解研究具有極其重要的意義。 本實驗的目的是通過對溴氨酸脫色酶的研究考察溴氨酸的降解機理。 用無機鹽培養(yǎng)基加入溴氨酸對菌進行培養(yǎng)?？疾炝送暾毎麑︿灏彼岬慕到馓匦?。無機鹽配方確定

2、為：K2HPO41.5g/L，KH2PO41.5g/L，乙酸鈉1g/L。以0.01mol/L的磷酸鉀為最佳緩沖溶液，濕重為10mg/ml的完整細胞的降解條件為：溫度30℃，pH=7.0，搖床轉(zhuǎn)速為150r/min。對溴氨酸的降解產(chǎn)物進行了液相色譜和質(zhì)譜分析，檢測到新產(chǎn)物鄰苯二甲酸和已經(jīng)被確認的產(chǎn)物2-氨基-3-羥基-5-溴苯磺酸和2-氨基-4-羥基-5-溴苯磺酸。說明溴氨酸直接開環(huán)生成了鄰苯二甲酸和2-氨基-3-羥基-5-溴苯磺酸和2-

3、氨基-4-羥基-5-溴苯磺酸。 用超聲破碎的方法提取出可以脫色溴氨酸的粗酶，首先確認了該酶為誘導(dǎo)酶，而非組成酶。而后考察了該粗酶對溴氨酸的降解條件：以NADH為必需的輔酶，該酶的最佳反應(yīng)溫度為50℃，最佳pH值為7.5。以溴氨酸為底物，在最佳反應(yīng)條件下，測定了粗酶降解溴氨酸的動力學(xué)特性，得到該酶的最大反應(yīng)速率為Vmax=6.993×10- mol/(min·mg　protein)，米氏常數(shù)Km=0.3mmol/L。對粗酶降解溴