組氨酸標(biāo)簽?zāi)揪厶敲傅臉?gòu)建表達(dá)和酶特性鑒定.pdf

1、半纖維素（hemicollulose）與纖維素、木質(zhì)素共同組成植物細(xì)胞壁的三大主要成分，木聚糖是半纖維素中的最主要成分。木聚糖酶（endo-1,4-xylanase,EC3.2.1.8）是糖苷水解酶家族的成員，可以水解纖維素的主要成分——木聚糖。近幾十年來，木聚糖酶廣泛應(yīng)用在工業(yè)生產(chǎn)中，包括紡織、食品、飼料、造紙和紙漿工業(yè)。同時有研究報道，這類酶在生物降解和生物轉(zhuǎn)化農(nóng)業(yè)廢棄物和副產(chǎn)品方面有廣闊的前景。根據(jù)氨基酸序列的相似程度以及核心催化

2、區(qū)域的結(jié)構(gòu)特點，木聚糖酶被分入糖苷水解酶第10和第11家族。第11家族木聚糖酶具有較小的分子質(zhì)量，在結(jié)構(gòu)上高度相似，并且有相似的木聚糖底物特異性。
　　11家族耐熱木聚糖1YNA分離自嗜熱真菌Thermomyces lanuginosus DSM10635，在Escherichia coli.BL21（DE3）中表達(dá)。為提高其穩(wěn)定性，利用PCR手段，在其N末端添加了一個二硫鍵Q1C-Q24C。得到重組酶DSB在pH6.5環(huán)境下最適

3、反應(yīng)溫度提高了10℃，達(dá)到了75℃。
　　為簡化DSB純化方式，本研究以木聚糖酶DSB基因為模板，利用PCR去除其終止密碼子后插入表達(dá)載體pET-22b（+），得到C末端添加多聚組氨酸標(biāo)簽（His·Tag）的木聚糖酶表達(dá)載體，構(gòu)建基因命名為dsb-his，并利用大腸桿菌表達(dá)。
　　表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni Sepharose親和層析純化，得到電泳純的酶。酶蛋白的大小，酶特性沒有受到組氨酸標(biāo)簽的影響。蛋白純化操作得到了簡化。