嗜熱真菌木聚糖酶1YNA的表達、突變和酶特性研究.pdf

1、木聚糖酶能將木聚糖降解為低聚木糖和少量木糖。在飼料、食品和造紙行業(yè)等都有極大地應用前景?，F(xiàn)在商業(yè)應用的木聚糖酶大部分都是通過工程菌大規(guī)模發(fā)酵得到的。到目前為止，來源于不同生物的多種木聚糖酶已經(jīng)被成功表達于大腸桿菌、芽孢桿菌、酵母和真菌等宿主。嗜熱真菌DSM10635所分泌的木聚糖酶屬于糖苷水解酶第11家族，其等電點為3.7，最適Ph是6.5，最適溫度是70℃，在Ph 5.5-9.0下都具有很高的酶活性。
　　 本論文通過簡并引物

2、對嗜熱真菌DSM10635的總DNA進行PCR，從而獲得木聚糖酶的基因，序列比對后發(fā)現(xiàn)此木聚糖酶基因含有一個內(nèi)含子，采用重疊延伸PCR技術除去內(nèi)含子后，即得到木聚糖酶的編碼序列。將編碼序列與表達載體Pet-22b(+)的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達宿主BL21(DE3)，誘導表達得到有生物活性的木聚糖酶。酶特性分析的結果表明原核表達的木聚糖酶的最適溫度為65℃，比嗜熱真菌DSM10635分泌的木聚糖酶的最適溫度低了一些。其熱穩(wěn)定性也要差一些。

3、>　　 實驗中我們對木聚糖酶基因進行了一些突變并將突變后的木聚糖酶基因表達于大腸桿菌。通過突變引物利用PCR技術將突變引入到木聚糖酶基因中。所有的突變木聚糖酶都成功的表達于大腸桿菌。突變酶酶特性分析的實驗結果表明突變酶發(fā)生了一些變化。N-端單個氨基酸的突變對木聚糖酶的性質(zhì)影響不大，但是加入二硫鍵后的木聚糖酶的性質(zhì)有了明顯的變化。加入二硫鍵后的木聚糖酶(如DSB1)的最適溫度為75℃，比未突變的1YNA增加了10℃。熱穩(wěn)定性也有了極大的