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認(rèn)證信息

認(rèn)證類型：個(gè)人認(rèn)證

認(rèn)證主體：常**（實(shí)名認(rèn)證）

IP屬地：河北

IP屬地：河北 更新時(shí)間：2024-03-14 格式：doc 頁(yè)數(shù)：4 大小：77.16KB 人氣指數(shù)：12 舉報(bào) 版權(quán)申訴

1、細(xì)胞凍存的常規(guī)程序?yàn)椋?、配置含10%15%（常見(jiàn)為10%）的DMSO或甘油，含10%20%血清的凍存培養(yǎng)液；一般來(lái)講血清含量可以在10%90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，另一方面可以在細(xì)胞凍存過(guò)程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞。有人親測(cè)10%血清凍存細(xì)胞，結(jié)果證明是可以的，但高血清比例的凍存液更有助于提高細(xì)胞活力，此外嬌貴的細(xì)胞可以適當(dāng)提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活

2、力。我們用的凍存液配方含10%的DMSO，40%的血清及50%的完全培養(yǎng)基，復(fù)蘇細(xì)胞后細(xì)胞狀態(tài)良好。，其他狀態(tài)的細(xì)胞也可凍存，但是復(fù)蘇時(shí)存活率會(huì)大大降低。3、用配好的凍存液重懸細(xì)胞，并調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至5106ml1107，轉(zhuǎn)移至凍存管中；具體凍存密度因細(xì)胞不同而異，高密度或者低密度對(duì)細(xì)胞成活率都有一定的影響。此階段細(xì)胞最好放于冰上或4℃，盡量減少細(xì)胞的常溫代謝活動(dòng)。4、細(xì)胞凍存：常見(jiàn)的方法主要有兩大類，一類為傳統(tǒng)方法，另一類為程序降溫；4

3、.1、傳統(tǒng)方法：凍存管置于4℃10min→20℃30min→80℃1618小時(shí)（或過(guò)夜）→轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期儲(chǔ)存。細(xì)胞置于4℃及20℃的時(shí)間不必太長(zhǎng)，且從4℃轉(zhuǎn)移至20℃時(shí)，最好顛倒混勻下細(xì)胞，防止細(xì)胞大量沉降堆積至管底，影響細(xì)胞復(fù)蘇。4.2、程序降溫：將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至細(xì)胞漸凍盒后放于80℃冰箱過(guò)夜或置于漸凍儀中以12℃min的降溫速率將至100℃后，再將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存；此過(guò)程的核心就是：緩降。因此，有人在凍存管外面包裹一團(tuán)拳頭大小的棉

4、花，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至80℃冰箱過(guò)夜后，次日直接轉(zhuǎn)移到液氮，這種簡(jiǎn)易的做法也是可行的。還有將80℃冰箱過(guò)夜后，又增加了一步將細(xì)胞懸掛于液氮液面上一段時(shí)間，再轉(zhuǎn)移至液氮，這種做法也可以一定程度上提高細(xì)胞的存活率。細(xì)胞復(fù)蘇的常規(guī)程序?yàn)椋?、快速解凍，液氮中取出凍存細(xì)胞后，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)細(xì)胞，待其全部融化；為使凍存管快速解凍，此過(guò)程中水浴溫度可以也調(diào)整至40℃，邊晃動(dòng)邊觀察，待凍存管中殘留有小塊冰時(shí)，停止即可，此時(shí)凍存管中細(xì)胞仍維持