人髓核細(xì)胞體外培養(yǎng)及凍存的實驗研究.pdf

1、目的:(1)研究頸椎前路手術(shù)術(shù)式所取髓核組織中髓核細(xì)胞生物學(xué)特性,及用于椎間盤髓核組織工程學(xué)種子細(xì)胞的可行性。(2)探討適合組織工程學(xué)種子細(xì)胞的髓核細(xì)胞的代次。(3)研究凍存復(fù)蘇處理是否影響髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白合成及細(xì)胞增殖。
　　方法:(1)采用酶消化法提取經(jīng)頸椎前路手術(shù)中取出的人頸椎間盤髓核組織中髓核細(xì)胞。(2)對髓核細(xì)胞進行體外培養(yǎng),應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長情況,應(yīng)用Ⅱ型膠原蛋白免疫組化法對細(xì)胞爬片的細(xì)胞進行鑒定

2、。(3)應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件測量傳1至5代次髓核細(xì)胞免疫組化照片平均光密度,從而觀察胞質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白含量的差異。(4)按細(xì)胞是否做凍存復(fù)蘇處理分為 A、B兩組,A組細(xì)胞于-80℃冰箱中凍存2周后復(fù)蘇的細(xì)胞,B組細(xì)胞為未經(jīng)凍存復(fù)蘇的細(xì)胞。應(yīng)用MTT法分別測量 A、B兩組 OD值,從而觀察 A、B兩組髓核細(xì)胞的增殖活力的差異。應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件對A、B兩組髓核細(xì)胞免疫組化照片進行平均光密度測量

3、,從而觀察在凍存對髓核細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白含量差異的影響。
　　結(jié)果:(1)采用酶消化法可成功分離并培養(yǎng)出人髓核細(xì)胞,傳1至2代細(xì)胞形態(tài)呈短梭型、三角形或多邊形,傳3代以后,細(xì)胞形態(tài)逐漸變?yōu)殚L梭型;(2)Ⅱ型膠原蛋白免疫組化測得平均光密度值,傳1與2代比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),傳3、4、5代與傳1代相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(3)A組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白免疫組化測得平均光密度值較B組細(xì)胞無明顯統(tǒng)計學(xué)差