血液分離技術(shù)

1、1第十八章血細(xì)胞分離技術(shù)（Separationtechniqueofthebloodcell）一、原理在體外進(jìn)行細(xì)胞免疫檢測(cè)時(shí)，首先必須進(jìn)行淋巴細(xì)胞的分離。分離淋巴細(xì)胞的方法很多，但不管采用哪種方法，均要求分離的淋巴細(xì)胞純度高、產(chǎn)量多，而且不喪失活性，同時(shí)也要求分離技術(shù)簡(jiǎn)單、操作方便。外周血液中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的比例在幾百甚至上千比一，兩類(lèi)細(xì)胞的大小和密度不同，其沉降速度也就不同。紅細(xì)胞的自然沉降率較快，加入高分子量的聚合物，如明膠、右旋

2、糖酐等還可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度離心法或二者結(jié)合，可以將淋巴細(xì)胞從血液中分離出來(lái)。這種分離出的淋巴細(xì)胞一般包括單核細(xì)胞。除去單核細(xì)胞，可以利用單核細(xì)胞的吸附功能，如鐵顆粒、玻璃面或尼龍網(wǎng)等，除去（或分離）單核細(xì)胞，從而提純淋巴細(xì)胞。二、采血（一）材料與試劑（一）材料與試劑1抗凝劑（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，進(jìn)而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素

3、溶液濃度為1000Uml，市售肝素多為100U~126U／mg。（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4％的溶液備用。3三、紅細(xì)胞的分離技術(shù)（一）材料與試劑（一）材料與試劑1肝素等抗凝劑23％明膠液取明膠3g，溶于0.9％滅菌鹽水100ml中，114.3℃滅菌10min，冷卻后4℃冰箱保存。臨用時(shí)，37℃預(yù)熱10min。3阿氏液（二）操作方法1采血抗凝，即為紅細(xì)胞。由于紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例相差懸殊，一般白細(xì)胞混雜

4、在其中，忽略不計(jì)。2根據(jù)紅細(xì)胞的用途，可做進(jìn)一步的處理。如計(jì)算紅細(xì)胞，可直接稀釋計(jì)數(shù)。如需做補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)，或其它溶紅細(xì)胞反應(yīng)，則需將紅細(xì)胞進(jìn)行充分的清洗，以除去附著在紅細(xì)胞膜表面的血漿。一般用等滲的稀釋液連續(xù)清洗，2000rmin離心10min，重復(fù)3~4次。3如需儲(chǔ)藏備用，則以阿氏液做抗凝劑采血，混勻后置4℃冰箱保存，可保存2周，其活性尚可。四、淋巴細(xì)胞的分離技術(shù)（一）材料與試劑（一）材料與試劑1淋巴細(xì)胞分層液有兩種：（1）聚蔗糖—泛

5、影葡胺液：聚蔗糖（polysucrosesolution）商品名Ficoll，分子量400000，多配制成401％（WV）水溶液，也有干粉出售。應(yīng)用時(shí)，用蒸餾水配制9％溶液。泛影葡胺溶液(Megluminidiatrizoici)，商品名Vrografin，結(jié)構(gòu)式為3，5—二乙酰氨基2，4，6三碘苯甲酸1—去氧—甲氨基山梨醇。含量為60％或75％，每安瓶為20ml裝，常用于人的臟器造影。應(yīng)用時(shí)，取60％泛影葡胺原液20ml，加雙蒸餾水1