臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)血液病micm檢驗(yàn)

1、血液病MICM檢驗(yàn),醫(yī)院血液內(nèi)科,背景介紹,血液病是原發(fā)于造血系統(tǒng)的疾病，或影響造血系統(tǒng)伴發(fā)血液異常改變，以貧血、出血、發(fā)熱為特征的疾病。,出血性疾病,貧血癥,白細(xì)胞疾病,常見血液病,造血系統(tǒng)惡性腫瘤,,FAB分型1976,MIC分型1986,MICM分型2001,MICM分型2008,白血病的診斷分型：MICM分型發(fā)展由來,,MICM分 型 2016,1827年， 法國的Alfred Velpeau 描述

2、第一例白血病1847 年，Virchow首次提出了“白血病”這個名稱1976年，法、美、英3國7位血液學(xué)家以光鏡下的形態(tài)為主，參照細(xì)胞化學(xué)染色，制定了FAB分型標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)志著現(xiàn)代白血病診斷與分型的開端 80年代末至90年代初，隨著免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了MICM（形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)）分型WHO造血和淋巴組織腫瘤分類方案（2001， 2008、2016）,FAB分型及WHO分類,FA

3、B：主要建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上WHO (2001和2008、2016)骨髓或外周血原始細(xì)胞比例≥20%將一些有明確診斷及預(yù)后指導(dǎo)意義的細(xì)胞或分子遺傳學(xué)異常作為診斷和分型的重要標(biāo)志將患者診斷之前的疾病狀態(tài)和治療措施納入考量,FAB和WHO分類方案的主要區(qū)別,急性髓細(xì)胞白血病（AML）和相關(guān)腫瘤 WHO分型,伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML伴MDS相關(guān)改變的AML 繼發(fā)于MDS或MDS/MPN伴有MDS相關(guān)細(xì)胞遺傳學(xué)異常2或3系50%

4、以上的細(xì)胞有發(fā)育異常治療相關(guān)性AML 不另作分類的AML髓細(xì)胞肉瘤Down’s綜合征相關(guān)髓系增生疾病母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤,伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML,AML with t(8;21)(q22;q22)RUNX1-RUNX1T1AML with inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)CBFB-MYH11APL with t(15;17)(q22;q12)PML-RARAAML wi

5、th t(9;11)(p22;q23)MLLT3-MLLAML with t(6;9)(p23;q34)DEK-NUP214AML with inv(3)(q21q26.2) or t(3;3)RPN1-EVI1AML -M7 with t(1;22)(p13;q13)RBM15-MKL1? AML with mutated NPM1? AML with mutated CEBPA,通常AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原

6、始細(xì)胞比例>20%，但如果t(8;21)、t(15;17)或inv(16)陽性，則不論原始細(xì)胞比例為多少，AML診斷成立,MICMFAB形態(tài)學(xué)診斷(Morphology)免疫學(xué)檢查(Immunology )細(xì)胞遺傳學(xué)檢查(Cytogenetics)分子遺傳學(xué)檢查(Molecular),MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介,形態(tài)學(xué)：外周血涂片、骨髓涂片±骨髓活檢免疫表型檢測：多參數(shù)流式細(xì)胞儀細(xì)胞遺傳學(xué)檢測常規(guī)核型

7、分析，分子核型分析FISH分子遺傳學(xué)檢測融合基因檢測（RT-PCR）：PML-RARA、AML1-ETO、CBFB-MYH11、MLL-…、BCR-ABL……基因突變：FLT3-ITD、CEBPA、NPM1、TET2、IDH1、NOTCH1、IKZF1、FBXW7……拷貝數(shù)變化（CNV）:SNP-array高通量測序技術(shù)……,病史形態(tài)學(xué)： 結(jié)構(gòu)：活檢細(xì)胞學(xué)：涂片骨髓血凝塊免疫分型：流式細(xì)胞或免疫組化細(xì)胞遺傳學(xué)：

8、核型分析、FISH分子遺傳學(xué)：融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突變（測序）,,白血病MICM診斷程序及技術(shù),白血病診斷的任務(wù)—不僅僅是FAB分類,是不是白血??？急性？慢性？系來源FAB分類預(yù)后分層治療、療效判斷MRD,病史+形態(tài),形態(tài)+免疫,形態(tài)+免疫+遺傳+分子,,,,形態(tài)+免疫+遺傳+分子,為什么需要MICM綜合診斷？,形態(tài)或病理或加細(xì)胞化學(xué)分析受觀察者個體經(jīng)驗(yàn)及分辨力的限制，一致率僅50-70%； 在此基

9、礎(chǔ)上增加免疫組化和/或FCM分析大大增加了分型的準(zhǔn)確率，可達(dá)90%以上； 染色體、FISH及基因分析，進(jìn)一步提高分型的準(zhǔn)確率,MICM整合診斷的臨床意義,全面正確診斷與分型 評估預(yù)后 確立檢測MRD的標(biāo)志，追蹤MRD 幫助建立分層、個性化的治療 定期追蹤幫助發(fā)現(xiàn)抗原丟失、克隆演變或突變 幫助確定病因或發(fā)病機(jī)制,MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介,細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞化學(xué)分析的優(yōu)缺點(diǎn),優(yōu)點(diǎn)： 直觀：鏡下直接觀察細(xì)胞形態(tài)，對MDS

10、的診斷、一些少見的、大的惡性細(xì)胞的確定優(yōu)于流式細(xì)胞分析惡性細(xì)胞的比例更準(zhǔn)確： 簡單快速，有顯微鏡即可完成報(bào)告缺點(diǎn)： 人為因素影響大 難以鑒別細(xì)胞的成熟階段，B、T等系列的惡性細(xì)胞 細(xì)胞較成熟時，難以鑒別良惡性 不能提供太多的預(yù)后信息,形態(tài)M,病理及免疫組織化學(xué)的優(yōu)缺點(diǎn),標(biāo)本直接固定，不容易損失信息，惡性細(xì)胞比例更客觀，對一些抽不出或少見細(xì)胞，仍可診斷。如伴骨髓纖維化、MM、淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、何杰

11、金細(xì)胞等 可以直接觀察到組織結(jié)構(gòu)，容易確定惡性細(xì)胞的組織部位 診斷慢、受診斷者個人經(jīng)驗(yàn)及知識水平影響大 對一些組織結(jié)構(gòu)無破壞、細(xì)胞形態(tài)改變不大的細(xì)胞，難以鑒定良惡性及成熟度 有些惡性細(xì)胞在液體中，難以獲取組織標(biāo)本，難以判斷組織結(jié)構(gòu),形態(tài)M,流式細(xì)胞術(shù),流式I,FCM檢測的參數(shù),,FSC: 細(xì)胞大小 SSC:細(xì)胞內(nèi)顆粒多少及細(xì)胞內(nèi)構(gòu)造的復(fù)雜性 FL：3-10多種（熒光素耦聯(lián)的單克隆抗體）,流式I,R8：幼稚細(xì)胞群，正常骨髓中此

12、群細(xì)胞數(shù)量極低或空缺,流式I,確定系來源原理：不同系有特定的抗原表達(dá)髓系/B系/T/NK系/組織細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞確定細(xì)胞分化階段不同發(fā)育階段細(xì)胞，其抗原表達(dá)不同預(yù)后判斷有些抗原表達(dá)和淋巴瘤/白血病預(yù)后相關(guān)治療方法選擇-治療靶向療效判斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測診斷雙表型、混合性，M0、未分化型等特殊類型白血病髓系分亞型與FAB分亞型有一定差異,1）血液系統(tǒng)腫瘤的免疫表型分析,,流式細(xì)胞免疫分型的作用,I： immunology,免疫

13、學(xué),M0 CD34,CD33,CD13 M1 MPO,CD34,CD33,CD13, HLA-DR M2 MPO,CD34,CD15,CD13, HLA-DR M3 MPO, CD33,CD13、CD9(HLA-DR、CD11b常陰性) M4 MPO,CD33,CD15,CD14,CD13 M5

14、 CD68,CD33,CD14,CD13,HLA-DR,CD36，CD64 M6 CD33,CD235a,CD71 M7 CD33,CD41,CD42b,CD61,急性髓系白血病免疫表型與FAB分型相關(guān)性,形態(tài)與免疫表型的符合性不足80%，不能脫離形態(tài)學(xué)單純依賴免疫表型進(jìn)行白血病的診斷與分型。FAB基于形態(tài)，兩者不符以形態(tài)為主。,流式I,混合性白血病的判定,如有2

15、系或以上的特異性標(biāo)志，可診斷為急性混合性白血病,流式I,MRD流式細(xì)胞學(xué)檢測,腫瘤細(xì)胞與正常起源細(xì)胞免疫表型不同跨系表達(dá)抗原表達(dá)不同步抗原表達(dá)丟失抗原表達(dá)減弱其它抗原表達(dá)初始免疫分型結(jié)果、白血病相關(guān)表型特點(diǎn)抗體組合越多覆蓋率越高、敏感性越高假陽性、假陰性均存在隨訪、動態(tài)觀察更有意義,流式I,監(jiān)測外周血造血干細(xì)胞的動員效果指導(dǎo)外周血造血干細(xì)胞的采集時機(jī)判斷造血干細(xì)胞采集量3）紅細(xì)胞分析網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞CD5

16、5和CD59表達(dá)水平分析紅細(xì)胞內(nèi)HbF的分析紅細(xì)胞表面相關(guān)免疫球蛋白測定,2）造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD34+細(xì)胞的測量）,流式細(xì)胞免疫分型的作用,流式細(xì)胞免疫分型的作用,4）血小板分析循環(huán)血小板活化分析血小板對體外不同刺激劑的反應(yīng)性測定血小板免疫表型分析血小板自身抗體測定血小板免疫計(jì)數(shù)網(wǎng)織血小板計(jì)數(shù)抗血小板藥物治療監(jiān)測5）外周血淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)監(jiān)測腫瘤患者的病情監(jiān)測機(jī)體的免疫狀態(tài)監(jiān)測病毒感染等等,FCM的優(yōu)缺點(diǎn)

17、,優(yōu)點(diǎn)：一次可檢測數(shù)萬至數(shù)十萬個細(xì)胞上的數(shù)十種標(biāo)記，可同時檢測每個細(xì)胞的六個以上參數(shù)，敏感性高，分析全面 更容易區(qū)分良惡性，惡性細(xì)胞的系列及成熟度 可幫助確定免疫治療的靶點(diǎn)并監(jiān)測療效，如CD20、CD19是監(jiān)測MRD覆蓋面最廣的方法。 快速、簡便、重復(fù)性好 缺點(diǎn)：不能確定組織結(jié)構(gòu)，一些罕見的大細(xì)胞不能分析到，一些細(xì)胞粘附性高，難以抽出。因此對HL等難以確診。判斷惡性細(xì)胞的比例不如形態(tài)準(zhǔn)確，對M6、MDS的診斷不如形態(tài)預(yù)后

18、價(jià)值不如染色體和基因的檢測,流式I,診斷誤區(qū)舉例,原始細(xì)胞增多是診斷前體惡性血液病尤其AL的重要指標(biāo)，但原始細(xì)胞應(yīng)根據(jù)免疫學(xué)標(biāo)志/基因/染色體證實(shí)為惡性造血前體細(xì)胞一些形態(tài)上的原始細(xì)胞可以是正常造血細(xì)胞（尤其見于兒童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化療后或移植后）,病例1 兒童B-ALL,化療3年后停藥，來我院復(fù)查，骨髓涂片8%的幼稚細(xì)胞,,,流式幼稚B淋巴細(xì)胞增生，未見異常表型,病例2 NK細(xì)胞白血病移植后40天，骨髓涂

19、片8%的幼稚細(xì)胞,,,流式: 未見表型異常細(xì)胞，CD34陽性細(xì)胞為幼稚B淋巴細(xì)胞,即染色體異常 包括染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常 根據(jù)這些特征性的異常，對惡性血液病進(jìn)行診斷和分類、預(yù)后分層及指導(dǎo)治療。,細(xì)胞遺傳學(xué)C,血液染色體檢驗(yàn),,,,,,,,,1950,1960,1970,1980,1990,2000,2010,,確定染色體數(shù)目=46,,發(fā)現(xiàn)Ph；發(fā)現(xiàn)+21,,各種顯帶技術(shù)出現(xiàn)；發(fā)現(xiàn)多數(shù)AL患者伴有染色體異常,,FISH出現(xiàn)；闡明某

20、些染色體異常的分子學(xué)改變,,SKYCGHPCR技術(shù)FLT3-ITD(1996)c-KIT突變（1993）…………..,,芯片技術(shù)：cDNA array、SNP-array、測序技術(shù)的發(fā)展大量基因突變的發(fā)現(xiàn)：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1…………..,,新一代高通量測序技術(shù)；各種遺傳學(xué)改變間的相互作用,白血病遺傳學(xué)研究的歷史,細(xì)胞遺傳學(xué)C,細(xì)胞遺傳學(xué)C,

21、多數(shù)AML患者有非隨機(jī)性染色體改變，包括易位、倒位、插入、缺失、擴(kuò)增、等臂染色體等染色體異常在AML診斷、分型、預(yù)后評價(jià)、發(fā)病機(jī)制研究及靶向治療藥物研發(fā)方面有重要價(jià)值一些特殊的細(xì)胞遺傳學(xué)異常在WHO分型建議中已被列為特殊亞型對不同細(xì)胞遺傳學(xué)類型的血液腫瘤患者進(jìn)行個體化治療可以獲得更好的療效,,AML的WHO分型,?伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML?伴多系發(fā)育異常的AML繼發(fā)于MDS；無MDS病史,?治療相關(guān)性AML,烷化劑相關(guān)；

22、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑相關(guān)；其它,?無法分類的AML?髓細(xì)胞肉瘤,?Down’s綜合征相關(guān)AML,細(xì)胞遺傳學(xué)C,,伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML,AML with t(8;21)(q22;q22)AML with inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)APL with t(15;17)(q22;q12)AML with t(9;11)(p22;q23)AML with t(6;9)(p23;q34)AML

23、 with inv(3)(q21q26.2) or t(3;3)AML -M7 with t(1;22)(p13;q13),RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1,? AML with mutated NPM1? AML with mutated CEBPA通常AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原始細(xì)胞比例為20%，但如果t(8;

24、21)、t(15;17)或inv(16)陽性，則不論原始細(xì)胞比例為多少，白血病診斷成立,細(xì)胞遺傳學(xué)C,細(xì)胞遺傳學(xué)C——染色體核型分析正常核型：男：46，XY女：46，XX異常核型：46，XY，t(8;21)(q22;q22)46，XX，t(15;17)(q22;q21.1)47,XY,del(6)(q15),+11,-15,add(17)(p13),+mar[16]……,MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介,Chromo

25、some Banding technology,Conception,G帶 R帶,Structure and Nomenclature of chromosome,Structure,Nomenclature,Group and Karyotype for normal Chromosome,Abnormal Chromosome and

26、 diseases,約55%的AML患者可檢出克隆性染色體異常分子遺傳學(xué)技術(shù)的進(jìn)展使得多數(shù)AML患者檢出基因水平的異常，如FLT3、CEBPα及NPM1基因的突變遺傳學(xué)異常對于理解AML發(fā)病機(jī)制、建立新的診斷方法、研發(fā)治療藥物或指導(dǎo)臨床治療有重要的價(jià)值在WHO分型建議中，一些特殊的遺傳學(xué)異常被列為診斷和分型的依據(jù)AML：50%~90%的患者細(xì)胞遺傳學(xué)可檢出異?？寺LL：大約60%～85%的患者可檢出克隆性染色體畸變,細(xì)胞遺傳

27、學(xué)C,Abnormal number,Abnormal structure,Abnormal structure of Karyotype： Congenital and Acquired,Description of Abnormal Karyotype,the mode of recording Chromosome 1p33.11 1號染色體短臂3區(qū)3帶1 亞帶1,Description of Karyotype

28、 46,XX,t(8;21)(q22;q22) [20],AML常見染色體異常,單一異常：45%≥2種異常：55%,-5/5q-；-7/7q-；＋8；-Y；+11；+13；+21; +22,3q26； del(9q)t(6;9)； t(9;22)等,,,,t(8;21)(q22;q22),見于約10%AML，形成8號染色體上的AML1-ETO 融合基因CR率高，EFS長，預(yù)后相對較好 20%-30%伴KIT突變，

29、復(fù)發(fā)率增高，預(yù)后較差≥75%伴性染色體丟失及del(9q)等附加異常，伴性染色體丟失不影響預(yù)后，伴del(9q)提示預(yù)后不良,AML-M2 t(8;21)(q22;q22),9q-,-Y,t(8;21)(q22;q22)模式圖,Common abnormity of AML chromosome,AML-M3 +8, t(15;17),AML-M3 t(11;17),?ATRA敏感 ?ATRA耐藥?ATRA相對耐藥

30、 ? 對ATRA敏感性未定,CML t(9;22)(q34;q11),inv(16)(p13;q22)/t(16;16)(p13;q22),見于約5%AML、20%AML-M4及100%AML-M4Eo遺傳學(xué)特點(diǎn)：因16號染色體較小及帶型的限制，常規(guī)核型分析容易漏診有典型形態(tài)學(xué)改變及常見繼發(fā)性異常的患者須行FISH或PCR檢測CBFβ/MYH11融合基因常伴繼發(fā)性異常：+8，+21，+22約30%患者亦存在KIT突變，復(fù)發(fā)率

31、增高、預(yù)后欠佳 化療敏感，預(yù)后相對好，易發(fā)生CNSL,AML-M4Eo 骨髓象,AML-M4Eo +8,inv(16),FISH檢測inv(16),inv(16)模式圖,一些染色體有診斷價(jià)值: 如重現(xiàn)性染色體異常，如t(8;21)，inv(16)、t（16；16）、 t(15;17)（q22;q12），t(5;14)(q31;q32) ，t(3;3),t(4;11)可直接診斷急性白血病； 一些染色體和/或基因有輔助診斷價(jià)值，如5q3

32、1、CEP7、7q31、CEP8、20q、CEPY、P53 高度疑似MDS等； 有-7、5q-、 t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、復(fù)雜染色體等的急性白血病預(yù)后不好,染色體的診斷價(jià)值,細(xì)胞遺傳學(xué)C,有絲分裂相少或缺如染色體質(zhì)量低劣，顯帶不佳染色體異常復(fù)雜如果惡性細(xì)胞不分裂，其結(jié)果是假陰性由于分析的細(xì)胞少，有部分白血病患者無染色體異 常，監(jiān)測殘留白血病不敏感,白血病染色體分析存在的問題：,細(xì)胞遺傳學(xué)C,熒光原

33、位雜交（FISH）,利用已知核酸序列作為探針，以熒光素直接標(biāo)記后與靶DNA進(jìn)行雜交，最后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號，從而對標(biāo)本中待測核酸進(jìn)行定性、定位和定量分析,細(xì)胞遺傳學(xué)C,熒光原位雜交 (FISH),生命科學(xué)中的“釣魚” 技術(shù)原理：通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交 目的：獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息,熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH

34、）,細(xì)胞遺傳學(xué)C,細(xì)胞遺傳學(xué)C——熒光原位雜交（FISH）探針類型雙色單融合（Dual Color, Single Fusion）雙色雙融合（Dual Color, Dual Fusion）雙色分離（Dual Color, Break Apart）額外信號（Extra Signal）建議與染色體核型分析同時送檢,細(xì)胞遺傳學(xué)C,雙色單融合示意圖,細(xì)胞遺傳學(xué)C,細(xì)胞遺傳學(xué)C,細(xì)胞遺傳學(xué)C,,,BCR/ABL雙色雙融合探針,細(xì)胞

35、遺傳學(xué)C,BCR/ABL額外信號探針,Role of Sex Chromosome in ALLO-BMT (異基因骨髓移植),細(xì)胞遺傳學(xué)C,有獨(dú)立的診斷及預(yù)后價(jià)值 可以檢測出顯微鏡下人眼難以分辨的染色體異常 診斷時間比染色體短 與染色體分析比較，對診斷人員的經(jīng)驗(yàn)依賴程度低 對不分裂的細(xì)胞也可以分析，分析的細(xì)胞數(shù)量比染色體多，更能反映正常和惡性細(xì)胞的比例，監(jiān)測殘留白血病比染色體敏感 可以對既往的骨髓片回顧分析，進(jìn)一步明確或排除

36、診斷 探針昂貴，每次只能分析1-2種異常，只能分析已知的染色體或基因異常,FISH的優(yōu)缺點(diǎn),細(xì)胞遺傳學(xué)C,,FISH檢測可以彌補(bǔ)染色體不足，染色體檢測為陰性，F(xiàn)ISH可能為陽性。,細(xì)胞遺傳學(xué)C,1）染色體是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)并有助與治療方案的選擇,細(xì)胞遺傳學(xué)C,2）鑒別白血病微小殘留病灶 (MRL),白血病化療或骨髓移植后達(dá)到完全緩解體內(nèi)殘存微量白血病細(xì)胞106-108檢測到原已消失的克隆性染色體異常和(或)新的克隆性染色體

37、異常時，往往預(yù)示疾病將復(fù)發(fā),3) 在骨髓增生異常綜合征(MDS)中的應(yīng)用,4) 在淋巴瘤中的應(yīng)用,5）在其他血液病中的應(yīng)用真性紅細(xì)胞增多癥（PV）常見的染色體異常有del(2v)(q11)，+8和+9，可見于PV病程的始末。原發(fā)性骨髓纖維化常見的染色體異常為-7，-9，+8，+2或lq、13q等結(jié)構(gòu)異常。在多發(fā)性骨髓瘤（MM)中的應(yīng)用,The role of chromosome in Disease Monitoring,,,,

38、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2×Ph，+8，i（17q）,,Abnormal chromosome recurrence,CML in blastic phase:,6）新的異常染色體的出現(xiàn)常提示復(fù)發(fā),有獨(dú)立的診斷及預(yù)后價(jià)值 可以檢測出染色體或FISH不能檢測出的異常，聯(lián)合染色體和 FISH，增加了

39、對疾病預(yù)后的判斷能力。 診斷時間比染色體及FISH短 與染色體及FISH分析比較，對檢測人員的經(jīng)驗(yàn)依賴程度低 是最敏感的監(jiān)測殘留白血病的指標(biāo) 對試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)質(zhì)控要求高 對無基因異常的疾病難以診斷 疾病是復(fù)雜的，僅有基因異常未必完全決定預(yù)后,基因檢測的優(yōu)缺點(diǎn),分子生物學(xué)M,Dohner, H. et al. Blood 2010;115:453-474,在AML 中, 基因突變與細(xì)胞遺傳學(xué)異常一樣普遍,AML基因突變,分子生

40、物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M——融合基因BCR/ABL：t(9;22)(q34;q11) PML/RARα：t(15;17)(q22;q21) AML1/ETO：t(8;21)(q22;q22) TEL/AML1：t(12;21)(p13;q22) E2A/PBX1：t(1;19)(q23;p13)……,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子

41、生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,血液病分子診斷的意義,分子生物學(xué)M,,31種白血病融合基因(122種變異體) 篩查,分子生物學(xué)M,,,,,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,急髓相關(guān)突變檢測,,CEBPA基因位于19

42、q13.11，CCAAT盒/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白，粒細(xì)胞分化過程中起重要作用，預(yù)后良好c-KIT基因位于4q11-21，t(8;21)和inv(16)伴c-KIT突變在AML預(yù)后危險(xiǎn)分級中由“低危”升級為“中?！盢-Ras為Ras基因家族成員之一，見于10%左右的M4、M5、M6，該突變預(yù)后意義尚不明FLT3-TKD，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶3-TK區(qū)域點(diǎn)突變，13q12，預(yù)后不良,分子生物學(xué)M,AML患者常見基因突變和異常表達(dá)的預(yù)后意義,分

43、子生物學(xué)M,骨髓增殖性腫瘤,分子生物學(xué)M,骨髓增生異常綜合征,NCCN提及的MDS分子檢測項(xiàng)目TET2突變，見于20%MDS，預(yù)后較好ASXL1突變，見于15%MDS，預(yù)后較差RUNX1突變、EZH2突變、ETV6突變，預(yù)后較差CBL突變、IDH2突變、U2AF1/U2AF35突變、SF3B1突變SRSF2突變、ZRSR2突變，預(yù)后較差，增加白血病轉(zhuǎn)化率,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,分子生物學(xué)M,MRD主要檢測方法比較,血液腫

44、瘤初診檢測方案建議,MICM整合報(bào)告,AL——系別不清形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型骨髓染色體核型分析分子生物學(xué)——白血病31種常見融合基因通篩,血液腫瘤初診檢測方案建議-AL,25個以上抗原，包括粒系、單核系、T系、B系、非系列特異性、干細(xì)胞（原始細(xì)胞）相關(guān)以及其他細(xì)胞等各種標(biāo)志；除可以進(jìn)行系別鑒定、亞型判斷外，還可進(jìn)行一定的預(yù)后評估。,可以宏觀、全面地檢查細(xì)胞內(nèi)所有染色體的各種異常，但對于一些微小異?；螂[匿性易位以及低含量的異常難

45、以查出。此外，由于標(biāo)本本身等各種原因的影響，會有一定比例的無分裂相出現(xiàn)。建議必要時配合行FISH檢測。,診斷相關(guān)類：AML1/ETO：多見于M2，少見于M4和M1；M2b中最多RARα相關(guān)融合基因：M3PML/RARαPLZF/RARαNPM/RARαCBFβ/MYH11：M4Eo,用藥相關(guān)類：BCR/ABL：格列衛(wèi)PML/RARα：全反式維甲酸（ATRA）NPM/RARα：全反式維甲酸（ATRA）AML1/ET

46、O：大劑量的阿糖胞苷CBFβ/MYH11：大劑量的阿糖胞苷,ALL——T、B等不清骨髓形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型細(xì)胞遺傳學(xué)檢測基因診斷——急淋15種常見融合基因篩查或者融合基因BCR/ABL、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL/AF4定量檢測,血液腫瘤初診檢測方案建議-ALL,流式細(xì)胞術(shù)免疫分型：T系：CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、 CD7、CD8、cCD3、TCRαβ、TCRγδ等B系：CD1

47、0、CD19、CD20、CD22、cIgM、cCD79a等NK系：CD16、CD56、CD57等,ALL-FISH套系：t(9;22)：預(yù)后極差11q23重排：預(yù)后差t(12;21)：預(yù)后好+4：預(yù)后好+10：預(yù)后好,ALL融合基因（建議查定量，但個別基因未開展定量檢測）：BCR/ABL：預(yù)后極差E2A/PBX1：常見于B-ALL，預(yù)后不良TEL/AML1：預(yù)后較好MLL/AF4：預(yù)后不良1p32染色體內(nèi)微缺失SI

48、L/TAL1：常見于T-ALL,微小殘留病灶指的是疾病集中的部位或是綜合病癥、感染的主要部位。血液腫瘤微小殘留病灶是指血液腫瘤治療達(dá)到完全緩解后，用常規(guī)的形態(tài)學(xué)檢測方法不能檢測到明顯的腫瘤病灶，而此時體內(nèi)仍存在的少量腫瘤細(xì)胞。微小殘留病灶是腫瘤復(fù)發(fā)的直接原因。因此，定期進(jìn)行微小殘留病灶的檢測，對于監(jiān)測療效、早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)傾向、及時干預(yù)、防止復(fù)發(fā)等方面有很重要的意義。,血液腫瘤治療后殘留檢測建議,骨髓形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)微小殘留病灶檢測（請

49、在申請單上注明亞型，最好附初診免疫分型報(bào)告；CMPD除外）查染色體核型分析或進(jìn)行特異性FISH檢測查特異性融合基因/基因突變定量、WT1基因定量等此外，還應(yīng)進(jìn)行耐藥相關(guān)檢測,血液腫瘤治療后殘留檢測建議,流式細(xì)胞術(shù)檢測微小殘留病灶依據(jù)為是否違背細(xì)胞正常分化模式：表面抗原系列的變異；表面抗原表達(dá)不同步；表面抗原表達(dá)的缺失；表面抗原強(qiáng)度的異常。,惡性血液的診斷、分型及預(yù)后免疫球蛋白重鏈基因和T細(xì)胞受體基因重排的檢測遺傳性血液

50、的診斷HLA基因多態(tài)性檢測腫瘤細(xì)胞多藥耐藥基因的檢測基因治療,血液分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的臨床應(yīng)用及評價(jià),舉例：患者，男，45歲，體檢發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞，高入院。血常規(guī)：WBC90×10^9/L,HB80g/L,plt90×10^9/L，幼稚細(xì)胞82%。有核紅細(xì)胞3個/100個WBC.骨髓像：M5。細(xì)胞化學(xué)染色：POX陽性，a-NAE、aNBE陽性，且被氟化鈉抑制。免疫分型：考慮急性髓系白血病。表達(dá)CD13、34