通則0512高效液相色譜法

1、通則通則05120512高效液相色譜法高效液相色譜法（20162016年3月2626日）(藥典四部藥典四部6060頁)110高效液相色譜法：高效液相色譜法：系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測器檢測，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。1.1.對儀器的一般要求和色譜條件對儀器的一般要求和色譜條件高效液相色譜儀由高壓輸

2、液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。色譜柱內(nèi)徑一般為3.9～4.6mm，填充劑粒徑為3～10μm。超高液相色譜儀：是適應(yīng)小粒徑（約2μm）填充劑的耐超高壓、小進(jìn)樣量、低死體積、高靈敏度檢測的高效液相色譜儀。（1）色譜柱色譜柱反相色譜柱：以鍵和非極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱。常見的載體有硅膠、聚合物復(fù)合硅膠和聚合物等；常用的填充劑優(yōu)十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠和苯基鍵合硅膠等。正相色譜柱：用硅膠填充

3、劑，或鍵合極性基團(tuán)的硅膠填充而成的色譜柱。常見的填充劑有硅膠、氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠等。氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠也可用作反向色譜。離子交換色譜柱：用離子交換填充劑填充而成的色譜柱。有陽離子交換色譜柱和陰離子交換色譜柱。手性分離色譜柱：用手性填充劑填充而成的色譜柱。通則通則05120512高效液相色譜法高效液相色譜法（20162016年3月2626日）(藥典四部藥典四部6060頁)310（3）流動相）流動相反相色譜系統(tǒng)的流動相常用甲

4、醇－水系統(tǒng)和乙腈－水系統(tǒng)，用紫外末端波長檢測時，宜選用乙腈水系統(tǒng)，流動相中應(yīng)盡可能不用緩沖鹽，如需用時，應(yīng)盡可能使用低濃度緩沖鹽。用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱時，流動相中有機(jī)溶劑一般不低于5%，否則導(dǎo)致柱效下降、色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。正相色譜系統(tǒng)的流動相：常用兩種或兩種以上的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷和正己烷等。品種正文項下規(guī)定的條件除填充劑種類、流動相組分、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫

5、、進(jìn)樣量、檢測器靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以達(dá)到系統(tǒng)適應(yīng)性試驗的要求。調(diào)整流動相組分比例時，當(dāng)小比例組分的百分比例X小于等于33%時，允許改變范圍為0.7X～1.3X；當(dāng)X大于33%時，允許改變范圍為X10%～X10%。若需使用小粒徑（約2μm）填充劑，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也應(yīng)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時，應(yīng)以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準(zhǔn)。當(dāng)必須使用特定牌號的