恩諾沙星在蚯蚓體內(nèi)的吸收、分布及對細胞色素P450的影響研究.pdf

1、近年來，環(huán)境保護與食品安全等已經(jīng)成為人類關(guān)注的焦點問題，其中包含藥品在內(nèi)的個人生活與護理用品（PPCPs）對生態(tài)環(huán)境的污染已逐漸引起人們的重視。藥物殘留對環(huán)境的污染已成為一個新興的熱門研究領(lǐng)域。恩諾沙星（Enrofloxacin，EF）是使用最為廣泛的獸藥之一，對于各種常見病原性革蘭氏陽性以及陰性菌有著良好的抗菌作用。在水產(chǎn)和畜禽養(yǎng)殖過程中被普遍應(yīng)用，以增強動物健康、促進生產(chǎn)。由于該藥的大量使用，導(dǎo)致了藥物及其代謝產(chǎn)物隨著畜禽的排泄物釋

2、放到環(huán)境中。這些藥物殘留及其代謝產(chǎn)物可能在土壤中蓄積，對生態(tài)環(huán)境造成污染。蚯蚓作為分布廣泛的大型土壤動物，對生態(tài)系統(tǒng)起著不可替代的作用，可作為預(yù)測化學(xué)物對土壤環(huán)境以及其他土壤無脊椎動物影響的良好指示生物。本文主要研究EF在蚯蚓體內(nèi)殘留的檢測方法，蚯蚓機體對EF的吸收、分布規(guī)律，以及EF對兩種典型CYP450亞酶蛋白表達的影響。
　　首先研究并建立了通過HLPC-FLD測定蚯蚓體內(nèi)EF殘留量的方法。樣品預(yù)處理方法為：將0.1 mol

3、·L-1H3PO4溶液(pH12)+乙腈(1+3 v/v)作為提取液，經(jīng)過提取、脫脂，濃縮，再溶解等步驟。液相色譜條件：FLD，發(fā)射波長為450 nm，激發(fā)波長為280 nm。流動相：0.025 mol·L-1磷酸/三乙胺緩沖液(pH3.0)+乙腈(83+17v/v)。EF的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為5～500 ng·ml-1，對其進行3種濃度回收率測定，所測得回收率范圍為81%～88%，平均回收率為84.5%；變異系數(shù)10%以內(nèi)；保留時間為11～

4、12min；最低檢出限為2 ng·mL-1。
　　然后研究了兩種標(biāo)準(zhǔn)蚯蚓生態(tài)毒理實驗方法，濾紙接觸試驗和自然土壤試驗中蚯蚓機體對EF的吸收規(guī)律。在濾紙接觸試驗中，以EF溶液進行濾紙染毒，使其濃度分別為：0.16、1.6、16、32μg·cm-2。48 h后檢測各個濃度下蚯蚓體內(nèi)EF的平均含量分別為1.53、16.81、113.32、120.83μg·g-1。自然土壤試驗中EF的染毒濃度分別為1、10、100、500 mg·kg-1

5、。將赤子愛勝蚓放入其中養(yǎng)殖，于1、3、7、21、28d后進行取樣，測定蚯蚓體內(nèi) EF的含量。結(jié)果顯示，1～7d蚯蚓體內(nèi)EF的含量主要呈上升趨勢，7d后基本達到峰值。1、10、100、500 mg·kg-1濃度組蚯蚓體內(nèi)EF的含量峰值分別為0.247、0.591、2.798和16.098 mg·kg-1。當(dāng)吸收達到峰值后，曲線短時期呈現(xiàn)一定的下降情況，但4個濃度組分別在21~28d、14~28d、21~28d、14~28d，蚯蚓體內(nèi)EF含

6、量達到基本平衡。此時，各濃度組的EF平均含量分別為0.220、0.577、3.486、13.971 mg·kg-1?？梢?，蚯蚓通過體表及消化道對EF有著良好的吸收。蚯蚓體內(nèi)EF的含量會隨時間的延長以及外界EF濃度的升高而增加，但最終將趨于平衡。同時，達到平衡時各處理組蚯蚓體內(nèi)EF的濃度分別都遠低于土壤中EF的濃度，4個濃度組的富集系數(shù)分別為0.220、0.058、0.025、0.028。可見，蚯蚓對EF有吸收但無富集效應(yīng)。本文還進行了E

7、F在蚯蚓機體中具體分布情況的研究。結(jié)果顯示，當(dāng)蚯蚓對EF的吸收達到平衡后，各組織器官中EF的含量從高到低排序為砂囊＞腸＞受精囊＞儲精囊＞體壁。在吸收過程中，各器官中EF的含量達到峰值后有一定的波動，符合上述蚯蚓整體 EF含量的變化趨勢。
　　CYP450是參與機體內(nèi)、外源化合物代謝的一族重要的血紅蛋白酶，也是主要的藥物代謝酶。很多藥物能夠?qū)YP450起到抑制或者誘導(dǎo)的作用，由此改變其自身或其他類似藥物的代謝過程。本文探索了低中高

8、3種濃度下，EF對蚯蚓體內(nèi)以CYP2B6和CYP2C9兩種亞酶蛋白表達的影響。結(jié)果顯示，0、10、100、500 mg·kg-1四個濃度組的CYP2B6/β-actin分別為1.930、3.120、2.953和2.406；CYP2C9/β-actin分別為2.473、3.891、3.747和3.141。在本文設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，EF對蚯蚓CYP450主要起到誘導(dǎo)作用，且誘導(dǎo)作用隨EF濃度的升高先增強后減弱。
　　本文的試驗結(jié)果為進一