雞肝微粒體細(xì)胞色素P450的初步研究.pdf

1、本文采用體外微粒體酶生化測定和體內(nèi)探針?biāo)幬锎x法評(píng)價(jià)了雞肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系活性，探討了苯巴比妥和地塞米松對(duì)雞肝微粒體CYP450的誘導(dǎo)作用。 1 雞肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系活性檢測方法的建立 12只60日齡依莎公雞頸靜脈放血處死，應(yīng)用差速離心法提取肝微粒體，Bradford法測定肝微粒體蛋白含量，紫外分光光度法測定CYP450酶系活性。結(jié)果顯示：肝微粒體蛋白含量為11.32±1.43 mg·g<'-1>，細(xì)

2、胞色素P450含量為0.71±0.08 nmol·mg<'-1>，NADPH-細(xì)胞色素C還原酶活力為3.01±0.26 nmol·mg<'-1>·min<'-1>，氨基比林-N-脫甲基酶(AND)活力為2.36±0.18 nmol·mg<'-1>·min<'-1>，紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)活力為1.21±0.11 nmol·mg<'-1>·min<'-1>，苯胺-4-羥化酶(AH)活力為0.25±0.03nmol·mg<'-1>

3、·min<'-1>。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)所建立的雞肝微粒體細(xì)胞色素P450活性的檢測方法靈敏可靠，可用于CYP450的系統(tǒng)研究。 2 探針?biāo)幬锇蔡姹攘朱o注在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究 健康雞12只，一次靜脈注射CYP450探針?biāo)幬锇蔡姹攘?0 mg·kg<'-1>，反相高效液相色譜法(RP-HPLc)法測定血漿中安替比林的濃度，進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。結(jié)果顯示：血漿中安替比林在0.1～30μg·mL<'-1>濃度范圍內(nèi)，藥物峰面積與濃度線

4、性關(guān)系良好(r=0.9995)，最低檢測限為0.1μg·mL<'-1>，低、中、高濃度(0.5、5.0、20μg·mL<'-1>)的血漿標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)回收率分別為93.44％、95.88％、97.21％，日內(nèi)和日間變異系數(shù)小于5％。安替比林靜注后藥-時(shí)數(shù)據(jù)符合二室開放模型，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：CL=0.041±0.01 L·kg<'-1>·min<'-1>，T<,1／2β>=29.35±6.57 min，AUC=503.25±92.34(μ

5、g·mL<'-1>)·min。結(jié)果表明：本實(shí)驗(yàn)所建立的安替比林血藥濃度測定的RP-HPLC法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，可用于安替比林消除動(dòng)力學(xué)模型的研究。安替比林靜注后在雞體內(nèi)分布和消除均較快，所得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可為探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)雞CYP450活性提供理論依據(jù)。 3 苯巴比妥和地塞米松對(duì)雞細(xì)胞色素P450的誘導(dǎo)作用研究 采用體外肝微粒體酶生化測定和體內(nèi)探針?biāo)幬?安替比林)代謝的方法，研究苯巴比妥(PB)和地塞米松(DEX

6、)對(duì)雞細(xì)胞色素P450(CYP450)有無誘導(dǎo)作用。將60只公雞隨機(jī)等分為對(duì)照組(生理鹽水)，PB誘導(dǎo)組(80 mg·kg<'-1>，i.p.x 5d和DEX誘導(dǎo)組(5mg·kg<'-1>，i.p.×5d)，進(jìn)行肝微粒體酶活性分析和安替比林(AP)藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，PB組和DEX組肝微粒體蛋白濃度和細(xì)胞色素P450總含量均顯著升高(P＜0.01)，安替比林代謝速率明顯加快。PB對(duì)氨基比林-N-脫甲基酶(AND)、紅