西方蜜蜂細(xì)胞色素P450單加氧酶特性初步研究.pdf

1、細(xì)胞色素P450酶系是多功能氧化酶(MFO)的核心酶系,在昆蟲中的作用涉及生長、發(fā)育、取食等過程,其對(duì)異生物質(zhì)的代謝特性造成了昆蟲對(duì)殺蟲劑的抗藥性和對(duì)植物次生物質(zhì)的耐受性,它還參與了昆蟲體內(nèi)保幼激素、蛻皮激素和脂肪酸等內(nèi)源化合物的合成與代謝,是昆蟲體內(nèi)一種重要的解毒酶系。國外對(duì)蜜蜂的研究表明,多功能氧化酶在蜜蜂體內(nèi)存在,也參與新陳代謝和對(duì)有毒物質(zhì)的降解,但這些研究主要集中在上世紀(jì)八十年代。近年來蜜蜂中毒事件時(shí)有發(fā)生,因此有必要對(duì)蜜蜂體內(nèi)

2、重要的解毒酶系-細(xì)胞色素P450酶系進(jìn)行研究,以便為蜜蜂保護(hù)提供指導(dǎo)。
　　 本論文對(duì)意大利蜜蜂細(xì)胞色素P450酶系的測(cè)定方法、組織分布、蟲態(tài)及月份變化規(guī)律、蜂種間差異以及藥劑誘導(dǎo)等進(jìn)行基礎(chǔ)性研究,同時(shí)運(yùn)用RACE方法對(duì)意大利蜜蜂細(xì)胞色素P450基因家族進(jìn)行研究。以7-乙氧基香豆素為底物,利用熒光分光光度法檢測(cè)產(chǎn)物7-羥基香豆素的熒光變化確定細(xì)胞色素P450的O-脫乙基活性,利用正交法找到了反應(yīng)條件最佳組合:反應(yīng)時(shí)間20 min

3、、溫度40℃、pH7.8,建立了適合蜜蜂的最佳反應(yīng)體系；明確了意大利蜜蜂細(xì)胞色素P450酶系O-脫乙基活性在頭、胸、中腸之間的組織分布情況:中腸>頭部>胸部；意大利蜜蜂細(xì)胞色素P450酶系O-脫乙基活性在不同齡期存在差異,從3齡開始逐漸升高,到封蓋第一天(6齡)達(dá)到整個(gè)齡期最高值,之后開始降低,直到蛹期,幼蜂和成蜂階段又有緩慢的升高,封蓋第一天活性值顯著高于其它齡期測(cè)定值；意大利蜜蜂幼蟲封蓋第一天細(xì)胞色素P450酶系O-脫乙基活性在不同

4、月份可發(fā)生變化,4-7月份的活性值顯著高于8-10月份；卡蜂、中蜂、意大利蜜蜂等不同蜂種間細(xì)胞色素P450酶系O-脫乙基活性存在差異,意大利蜜蜂和卡蜂的活性明顯大于中蜂,差異顯著；采用藥膜法,用氟胺氰菊酯、雙甲脒、馬拉硫磷、滅多威致死中濃度處理意大利蜜蜂48h后,頭部和中腸的活性較對(duì)照組均有升高,但是頭部變化差異均不顯著,中腸變化差異顯著(除雙甲脒)。采用RACE方法對(duì)意大利蜜蜂細(xì)胞色素P450基因家族進(jìn)行研究,根據(jù)細(xì)胞色素P450與血