ms分析經(jīng)驗(yàn)

1、1977年，LCMS開始投放市場1978年，LCMS首次用于生物樣品分析1989年，LCMSMS取得成功1991年，APILCMS用于藥物開發(fā)1997年，LCMSMS用于藥物動(dòng)力學(xué)高通量篩選2002年美國質(zhì)譜協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)的藥物色譜分析各種不同方法所占的比例。1990年，HPLC高達(dá)85%，而2000年下降到15%，相反，LCMS所占的份額從3%提高到大約80%。我們國家目前在這方面可能相當(dāng)于美國1990年的水平。為此我們還有很長的一段路要走

2、色譜質(zhì)譜的在線聯(lián)用將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜混合物更準(zhǔn)確的定量和定性分析。而且也簡化了樣品的前處理過程，使樣品分析更簡便。色譜質(zhì)譜聯(lián)用包括氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GCMS)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LCMS)，液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用互為補(bǔ)充，分析不同性質(zhì)的化合物。液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)別:氣質(zhì)聯(lián)用儀(GCMS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫

3、對(duì)比。液質(zhì)聯(lián)用(LCMS)主要可解決如下幾方面的問題：不揮發(fā)性化合物分析測定；極性化合物的分析測定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測定；沒有商品化的譜庫可對(duì)比查詢，只能自己建庫或自己解析譜圖?，F(xiàn)代有機(jī)和生物質(zhì)譜進(jìn)展在20世紀(jì)80及90年代，質(zhì)譜法經(jīng)歷了兩次飛躍。在此之前，質(zhì)譜法通常只能測定分子量500Da以下的小分子化合物。20世紀(jì)70年代，出現(xiàn)了場解吸（FD）離子化技術(shù)，能夠測定分子量高達(dá)1

4、500~2000Da的非揮發(fā)性化合物，但重復(fù)性差。20世紀(jì)80年代初發(fā)明了快原子質(zhì)譜法（FABMS），能夠分析分子量達(dá)數(shù)千的多肽。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，欲分析的樣品更加復(fù)雜，分子量范圍也更大，因此，電噴霧離子化質(zhì)譜法（ESIMS）和基質(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜法（MALDIMS）應(yīng)運(yùn)而生。目前的有機(jī)質(zhì)譜和生物質(zhì)譜儀，除了GCMS的EI和CI源，離子化方式有大氣壓電離（API）（包括大氣壓電噴霧電離ESI、大氣壓化學(xué)電離APCI、大氣壓光電離

5、APPI）與基質(zhì)輔助激光解吸電離。前者常采用四極桿或離子阱質(zhì)量分析器，統(tǒng)稱APIMS。后者常用飛行時(shí)間作為質(zhì)量分析器，所構(gòu)成的儀器稱為基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（MALDITOFMS）。APIMS的特點(diǎn)是可以和液相色譜、毛細(xì)管電泳等分離手段聯(lián)用，擴(kuò)展了應(yīng)用范圍，包括藥物代謝、臨床和法醫(yī)學(xué)、環(huán)境分析、食品檢驗(yàn)、組合化學(xué)、有機(jī)化學(xué)的應(yīng)用等；MALDITOFMS的特點(diǎn)是對(duì)鹽和添加物的耐受能力高，且測樣速度快，操作簡單。質(zhì)譜原理簡介：質(zhì)

6、譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測量各種離子譜峰的強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)分析目的的一種分析方法。以檢測器檢測到的離子信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，離子質(zhì)荷比為橫坐標(biāo)所作的條狀圖就是我們常見的質(zhì)譜圖。常見術(shù)語:質(zhì)荷比:離子質(zhì)量(以相對(duì)原子量單位計(jì))與它所帶電荷(以電子電量為單位計(jì))的比值寫作(2)確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式高分辨質(zhì)譜可以由分子量直接計(jì)算出化合物的元素組成從而推出分子式低分辨質(zhì)譜利用元素的同位素豐度，例:(3)峰強(qiáng)度與結(jié)

7、構(gòu)的關(guān)系豐度大反映離子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定在元素周期表中自上而下，從右至左，雜原子外層未成鍵電子越易被電離，容納正電荷能力越強(qiáng)，含支鏈的地方易斷，這同有機(jī)化學(xué)基本一致，總是在分子最薄弱的地方斷裂。不同類型有機(jī)物有不同的裂解方式相同類型有機(jī)物有相同的裂解方式只是質(zhì)量數(shù)的差異需要經(jīng)驗(yàn)記憶。質(zhì)譜解析的一般步驟(適于低分辨小分子譜圖若已經(jīng)是高分辨質(zhì)譜圖得到元素組成更好)(1)核對(duì)獲得的譜圖扣除本底等因素引起的失真考慮操作條件是否適當(dāng)(2)綜合樣品其他知識(shí)：

8、例如熔點(diǎn)，沸點(diǎn)，溶解性等理化性質(zhì)，樣品來源，光譜，波譜數(shù)據(jù)等.(3)盡可能判斷出分子離子。(4)假設(shè)和排列可能的結(jié)構(gòu)歸屬：高質(zhì)量離子所顯示的，在裂解中失去的中性碎片，如M1，M15，M18，M20，M31......意味著失H，CH3，H2O，HF，OCH3......(5)假設(shè)一個(gè)分子結(jié)構(gòu)，與已知參考譜圖對(duì)照，或取類似的化合物，并作出它的質(zhì)譜進(jìn)行對(duì)比。有機(jī)質(zhì)譜的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):(1)定分子量準(zhǔn)確，其它技術(shù)無法比。(2)靈敏度高，常規(guī)107—

9、108g單離子檢測可達(dá)1012g。(3)快速，幾分甚至幾秒。(4)便于混合物分析，LCMS，MSMS對(duì)于難分離的混合物特別有效其它技術(shù)無法勝任。(5)多功能，廣泛適用于各類化合物。局限性:(1)異構(gòu)體，立體化學(xué)方面區(qū)分能力差。(2)重復(fù)性稍差，要嚴(yán)格控制操作條件。所以不能象低場NMR，IR等自己動(dòng)手，須專人操作。(3)有離子源產(chǎn)生的記憶效應(yīng)，污染等問題。(4)價(jià)格稍顯昂貴，操作有點(diǎn)復(fù)雜。質(zhì)譜儀器：質(zhì)譜儀由以下幾部分組成數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)┏━