小鼠胚胎操作

1、小鼠胚胎操作,蘇鐵18296252671,小鼠發(fā)育須知的數(shù)據(jù),第一章 小鼠發(fā)育概要,0~1dpc,1dpc,2dpc,3dpc,4dpc,4.5dpc,5dpc,6dpc,7dpc,7.5dpc,9.5dpc,8.5dpc,8dpc,10dpc,9dpc,6.5dpc,11.5dpc,11.0dpc,12dpc,13dpc,16dpc,15dpc,14dpc,10.5dpc,,,,,18dpc,19dpc,17dpc,第一節(jié)

2、生殖細(xì)胞系的起源,1,在7.0dpc可以在原腸期的后羊膜褶區(qū)域檢測(cè)到PGC,在10.5dpc-11.5dpc，PGC到達(dá)生殖嵴,13.0dpc，每個(gè)生殖嵴原基中約有25000個(gè)PGC,4,2,3,,5,進(jìn)入生殖嵴后，PGC繼續(xù)發(fā)育，最終形成精子和卵子,PGC的大致遷移路徑,,,,,,12.5dpc,雄性,雌性,第二節(jié) 精子發(fā)生,1.精子發(fā)生的特點(diǎn) (1) 精子發(fā)生是連續(xù)同步和空間有序分化的 (2) 精子發(fā)生依賴干細(xì)胞群體

3、，這種干細(xì)胞群體 具有自我更新和產(chǎn)生后代為精子的能力 (3) Y染色體在精子發(fā)生過(guò)程中，對(duì)性別決定起著 十分重要的作用,2.精子發(fā)生的過(guò)程,第三節(jié) 卵子發(fā)生,1.卵子發(fā)生的特點(diǎn) (1) 在第一次減數(shù)分裂前，卵母細(xì)胞會(huì)在雙線期停滯很長(zhǎng)時(shí)間 (2)11.5dpc的卵母細(xì)胞中，只有一條染色體是有活性的，但是到了12.5dpc，兩條都變得活躍 (3)卵母細(xì)胞的基因組去甲基

4、化程度高,2.卵子發(fā)生的過(guò)程,第四節(jié) 排卵,1.排卵的過(guò)程少數(shù)卵泡在FSH的刺激下，積累液體，體積膨脹，向卵巢外周移動(dòng)，為卵母細(xì)胞最后的成熟和排放做好準(zhǔn)備卵母細(xì)胞在LH的刺激下，發(fā)生核的成熟，即：細(xì)胞核失去核膜，染色體組裝在紡錘體中 ，向細(xì)胞外周移動(dòng)，完成第一次減數(shù)分裂. 第一次減數(shù)分裂后的阻滯時(shí)期，卵母細(xì)胞最終從卵泡中排放出來(lái)，知道受精以后，才能刺激第二次減數(shù)分裂,即將排除的卵子,第五節(jié) 受精,1.精子的獲能：精子進(jìn)入輸

5、卵管壺腹部以后，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的成熟，獲得了受精的能力。精子獲能后將穿透卵丘團(tuán)和透明帶，達(dá)到卵母細(xì)胞表面2.頂體反應(yīng)：頂體是覆蓋于精子頭部細(xì)胞核前方、介于核與質(zhì)膜間的囊狀細(xì)胞器。頂體與精子頭部質(zhì)膜融合，釋放出各種水解酶，稱之為頂體反應(yīng)3.受精：精子頭后區(qū)與卵母細(xì)胞膜的融合促進(jìn)了一系列反映的級(jí)聯(lián)發(fā)生，稱之為受精4.透明帶反映：受精后，卵母細(xì)胞表面發(fā)生阻止后來(lái)精子入卵的變化，這有助于阻止多精受精的發(fā)生,第六節(jié) 胚胎的早期發(fā)育,1.卵裂

6、：卵子受精后形成受精卵，受精卵發(fā)生核膜解 體，染色體重組等變化后，開(kāi)始發(fā)生卵裂。卵裂所產(chǎn)生的細(xì)胞稱為卵裂球，每個(gè)卵裂秋都具有全能性2.桑葚胚：3次卵裂后的胚胎，各卵裂球相互靠近，形成一個(gè)緊密的細(xì)胞球，這樣的細(xì)胞球稱為桑葚胚。桑葚胚內(nèi)部的細(xì)胞與外界環(huán)境隔開(kāi)，可以起到穩(wěn)定細(xì)胞球的作用,3.囊胚的形成：桑葚胚形成后，卵裂球分泌的液體聚集在細(xì)胞間隙，最后在胚胎的中央形成一個(gè)充滿液體的腔，這個(gè)腔稱為囊胚腔。隨著囊胚腔的擴(kuò)張，細(xì)胞的分化

7、逐漸明顯：小而分裂活躍的細(xì)胞聚集在外周，形成胚胎外層，繼而成為滋養(yǎng)層；大而分裂慢的細(xì)胞聚集在內(nèi)側(cè)，稱為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。此時(shí)的胚胎稱為囊胚,8細(xì)胞期以后,胚胎的早期發(fā)育,卵裂開(kāi)始,16細(xì)胞期以后,外側(cè),內(nèi)側(cè),第七節(jié) 胚胎植入子宮,1.在5.0dpc時(shí)，滋養(yǎng)層細(xì)胞合成的蛋白酶消化透明帶，使胚泡從透明帶中孵化出來(lái)，為附植做好準(zhǔn)備2.在胚胎植入時(shí)，子宮壁緊密閉合，使子宮腔密閉，子宮上皮表面也發(fā)生變化，使之接受胚泡的附植。胚泡通過(guò)胚胎對(duì)側(cè)極附著到

8、子宮系膜對(duì)側(cè)的子宮壁上。胚泡植入子宮大致的分布受到子宮蠕動(dòng)的影響,第八節(jié) 滋養(yǎng)外胚層及其衍生物,1.滋養(yǎng)外胚層：胚胎在植入子宮后，滋養(yǎng)外胚層不再維持單層上皮狀態(tài)，而是在形態(tài)學(xué)和生長(zhǎng)潛能上發(fā)生區(qū)域性的分化2.壁滋養(yǎng)外胚層：起源于圍繞胚泡腔的細(xì)胞，這些細(xì)胞停止分裂，體積變大，形成含有1000倍于單倍體DNA的多線染色體，他們也被稱為初級(jí)滋養(yǎng)層巨細(xì)胞,3.極滋養(yǎng)外胚層：胚胎植入子宮后，極滋養(yǎng)外層向著多個(gè)方向擴(kuò)展,,首先，一些細(xì)胞圍繞胚胎

9、遷移，取代初級(jí)壁滋養(yǎng)層巨細(xì)胞，并且它們也成為多倍體,然后，極滋養(yǎng)外胚層形成一個(gè)指狀突起，穿入胚泡腔，形成原腸期以前的胚外外胚層，并把ICM衍生物推向它的前方，這個(gè)突起發(fā)育成中心腔并形成上皮。胚外中胚層形成以后，胚外外胚層向胎盤(pán)退縮，在那里形成絨毛膜,最后，一些滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞繼續(xù)穿入子宮內(nèi)膜，形成胎盤(pán)的主體，一些胎盤(pán)細(xì)胞和絨毛膜細(xì)胞也變?yōu)槎啾扼w,,,極滋養(yǎng)外胚層,原始內(nèi)胚層,壁滋養(yǎng)外胚層,4.5dpc時(shí)的胚胎,第九節(jié) 原始內(nèi)胚層和外胚層

10、的分化,1.原始內(nèi)胚層首先出現(xiàn)在無(wú)極性的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表面，而剩下的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)核心細(xì)胞形成原始外胚層細(xì)胞2.原始內(nèi)胚層細(xì)胞并不形成胚胎的內(nèi)胚層組織，而是只形成卵黃囊的胚外側(cè)壁內(nèi)胚層和臟內(nèi)胚層3原始外胚層細(xì)胞系形成胚胎的外胚層，中胚層，內(nèi)胚層組織，生殖細(xì)胞以及胚外膜和胚胎的中胚層成分,,,內(nèi)細(xì)胞團(tuán),內(nèi)胚層,外胚層,臟內(nèi)胚層,壁內(nèi)胚層,原始外胚層,原始內(nèi)胚層,中胚層,,,卵黃囊胚外側(cè),胚胎,,,第十節(jié) 表胚層,1.在胚胎植入時(shí)，胚泡由三種

11、組織細(xì)胞系組成，即滋養(yǎng)外胚層、原始內(nèi)胚層和表胚層。表胚層細(xì)胞最少，位于極滋養(yǎng)外胚層和原始內(nèi)胚層之間2.胚胎植入后不久，表胚層細(xì)胞組織成一單層上皮，圍繞著其中心一個(gè)小的空腔——前羊膜腔3.表胚層是多發(fā)育潛能的組織，實(shí)驗(yàn)表明，表胚層是未來(lái)胎兒組織的唯一來(lái)源，包括體細(xì)胞組織，也包括生殖細(xì)胞系,第十一節(jié)原腸作用：中胚層和終末內(nèi)胚層的形成,1.原腸作用：指囊胚細(xì)胞有規(guī)則的移動(dòng)，使未來(lái)的內(nèi)胚層和中胚層細(xì)胞遷入胚胎內(nèi)部，而未來(lái)的外胚層細(xì)胞鋪展

12、在胚胎的表面，從而形成原腸胚。其結(jié)果是產(chǎn)生了三個(gè)胚層——外胚層、內(nèi)胚層、中胚層——的分化，作為進(jìn)一步分化的基礎(chǔ)2.原條：從后端緣區(qū)向前伸展的條帶，是由表胚層細(xì)胞向囊胚腔下陷造成的，引導(dǎo)表胚層細(xì)胞的遷移，形成中胚層組織和部分內(nèi)胚層組織。小鼠胚胎中最早能夠識(shí)別的原始生殖細(xì)胞位于原條后端,3.原條的作用：原腸作用大約在6.5dpc開(kāi)始，此時(shí)原條在胚胎與胚外組織交界的表胚層區(qū)域形成，原條的位置標(biāo)志著未來(lái)胚胎的后部4中胚層的形成：在原條區(qū)

13、，表胚層細(xì)胞失去上皮的連續(xù)性，細(xì)胞通過(guò)運(yùn)動(dòng)或分層移動(dòng)到表胚層和臟內(nèi)胚層之間，形成一個(gè)新的胚層，即中胚層5.終末內(nèi)胚層的形成：一些細(xì)胞也被內(nèi)卷到臟內(nèi)胚層外側(cè)，形成最初的一群終末內(nèi)胚層，也稱為腸內(nèi)胚層,6.原條的伸展：之后，中胚層細(xì)胞和終末內(nèi)胚層細(xì)胞會(huì)隨著原條細(xì)胞的擴(kuò)展而進(jìn)行移動(dòng)，最終導(dǎo)致胚胎前后體軸不均等形態(tài)變化7.羊膜褶的形成：擴(kuò)展的中胚層細(xì)胞群推動(dòng)表胚層的近端和外胚層的遠(yuǎn)端向前羊膜腔的中部移動(dòng)，這導(dǎo)致形成了一個(gè)顯著的嵴，被稱為

14、羊膜褶,8.尿囊的形成：隨著體腔的形成，一些從原條后部新生的胚外中胚層形成一個(gè)特殊的結(jié)構(gòu)——尿囊。尿囊在中胚層中生長(zhǎng)，貫穿體腔并與絨毛膜融合。這就形成了尿囊絨毛膜胎盤(pán)的主要成分，并在胎兒和母體之間提供了營(yíng)養(yǎng)和廢物交換的直接途徑,第十二節(jié) 尾芽,1.在原腸作用第十天，尾芽取代原條成為新組織的來(lái)源2.尾芽組織分裂迅速，在胚胎的后部發(fā)育形成體節(jié)和側(cè)板中胚層、神經(jīng)管、脊索和原腸內(nèi)胚層,第十三節(jié) 胚胎旋轉(zhuǎn),在早體節(jié)期，小鼠胚胎呈U形，相

15、對(duì)于羊膜腔而言，各個(gè)胚層在胚胎中是倒轉(zhuǎn)的。外胚層位于胚體的內(nèi)部，而內(nèi)胚層位于外部和卵黃囊腔中。胚胎旋轉(zhuǎn)有效地逆轉(zhuǎn)了這種位置關(guān)系，使胚胎形成包括動(dòng)物胚胎經(jīng)典的C形結(jié)構(gòu)。它包括胚胎的頭、尾部分別向相反的方向旋轉(zhuǎn)，也包括同時(shí)發(fā)生的胚體逆時(shí)針180°旋轉(zhuǎn)。這些旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)同時(shí)也代表著胚胎外膜的完全發(fā)育,第十四節(jié) 體節(jié)及其衍生物,1.體節(jié)及其衍生物代表著脊椎動(dòng)物胚胎最為明顯的分節(jié)特征2.體節(jié)起源于中胚層的一條稱為前體節(jié)中胚層或體節(jié)板的

16、結(jié)構(gòu)前體節(jié)中胚層及其衍生物被統(tǒng)稱為軸旁中胚層3.體節(jié)的發(fā)生起始于7.75dpc，并持續(xù)到原腸作用的第14d，一共有大約65對(duì)體節(jié)出現(xiàn)，它們沿著胚胎前后軸先后形成,4.大部分的頭骨起源于神經(jīng)嵴，頭部軸旁中胚層的主要衍生物是眼睛和腮弓的肌肉組織5.身體兩側(cè)的前體節(jié)中胚層周期性地同時(shí)形成一個(gè)上皮圍繞的球體，從而產(chǎn)生一對(duì)新的體節(jié)。所以，體節(jié)區(qū)的伸長(zhǎng)是由末端不斷添加新的體節(jié)而導(dǎo)致的6每個(gè)體節(jié)一旦形成以后即經(jīng)歷大致相同的成熟過(guò)程。上皮性

17、結(jié)構(gòu)大約維持10h，然后位于腹側(cè)邊緣的細(xì)胞擴(kuò)散開(kāi)來(lái)并向脊索移動(dòng)；這些細(xì)胞代表著生骨節(jié)，即脊椎骨和肋骨的前體,7.在背側(cè)，體節(jié)的上皮性組織在生皮肌節(jié)中得以維持。中間的生肌節(jié)成為將來(lái)形成背部和脊椎骨周圍的肌肉，而側(cè)部的生肌節(jié)細(xì)胞形成體壁和四肢的的肌肉8.生皮節(jié)將來(lái)形成軀干和尾巴皮膚的真皮部分,第十五節(jié) 側(cè)板和間介中胚層以及它們 的衍生物,1.體節(jié)側(cè)面的中胚層被進(jìn)一步分為間介中胚層和側(cè)中胚層2.側(cè)中胚層分裂為兩個(gè)部分，形成體

18、腔。在背面，胚體壁被外胚層覆蓋并與羊膜中胚層相連；在腹面，胚胎壁與內(nèi)胚層相鄰并與卵黃囊中胚層相連3.側(cè)中胚層發(fā)育成參與內(nèi)臟和四肢結(jié)締組織發(fā)育的間充質(zhì)細(xì)胞、體腔的間皮以及腸系膜,4.在9.0~9.5的小鼠胚胎中，軀干后部和臨近尾巴的間介中胚層分化成原腎管腎原基5.緊接著，腎生殖嵴在軀干中部到尾中部區(qū)域出現(xiàn)。尿生殖嵴的側(cè)部形成中腎，而中部成分則形成生殖腺6.此外，后部的中腎管形成了一個(gè)重要的分支——輸尿管芽，它是誘導(dǎo)形成后腎所必

19、需的。被誘導(dǎo)形成腎原基的中胚層是軀體后部的間接中胚層,第十六節(jié) 四肢發(fā)生,1.組織切除和嫁接等實(shí)驗(yàn)確定了肢芽中三個(gè)負(fù)責(zé)建立成體四肢形態(tài)特征的重要區(qū)域：頂端外胚層嵴、頂端外胚層下的前進(jìn)區(qū)和極化活性區(qū)2.肢芽是由表面外胚層包繞的側(cè)中胚層向外生長(zhǎng)而產(chǎn)生的3.前肢芽最早在大約9.0~9.5dpc出現(xiàn)在臨近第7~12對(duì)體節(jié)處4.后肢芽在9.5~10.0dpc出現(xiàn)在23~28對(duì)體節(jié)處出現(xiàn),第十七節(jié) 神經(jīng)化：神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生,1.腦和脊髓起源

20、于外胚層原條前部增厚的一條細(xì)胞，即神經(jīng)板，它最早在7.5dpc的小鼠胚胎中出現(xiàn)，并且伸長(zhǎng)分化成為神經(jīng)外胚層2.神經(jīng)板形成以后，其形態(tài)隨之發(fā)生劇烈的變化，它的兩側(cè)邊緣逐漸升高，形成神經(jīng)褶3.神經(jīng)褶的兩側(cè)邊緣上卷并相互接觸，最終融合形成神經(jīng)管,第十八節(jié) 神經(jīng)嵴,1.神經(jīng)嵴是起源于神經(jīng)管背側(cè)、神經(jīng)上皮和表皮外胚層連接部的一個(gè)臨時(shí)細(xì)胞群體。神經(jīng)嵴細(xì)胞以單細(xì)胞形式進(jìn)行廣泛的遷移，從神經(jīng)管遷移到背部和腹部的很多部位，并同時(shí)分化為多種細(xì)胞類

21、型2.它們的衍生物包括腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞、骨和軟骨、黑色素細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺細(xì)胞，以及不同類型的神經(jīng)元,第十九節(jié) 腮弓和咽區(qū)的發(fā)生,1.從8.0dpc開(kāi)始，六對(duì)咽弓在胚胎咽區(qū)以頭尾順序依次發(fā)生，它們組成了頭頸部的主要構(gòu)造元件。每一個(gè)咽弓都是由外胚層覆蓋的間充質(zhì)條帶，它們以弧形圍繞著未來(lái)的口腔側(cè)面和底面2.最前端的以對(duì)腮弓最早形成，并且在遠(yuǎn)端分叉，分別形成上頜骨和下頜骨的原基。上頜骨和下頜骨的原基在11dpc分離，分別形成上頜

22、和下頜3.第二對(duì)腮弓的生長(zhǎng)超過(guò)第三對(duì)和第四對(duì)腮弓，是頸部的主要構(gòu)成成分,第二十節(jié) 腸的發(fā)育,1.胚胎的腸來(lái)自于表胚層，大多數(shù)的表胚層細(xì)胞通過(guò)原條前部參與形成腸原基2.在腸成為一個(gè)與其他組織分離的管道以前，終末內(nèi)胚層的兩側(cè)邊緣是與腹部的卵黃囊內(nèi)胚層向連續(xù)的，而且脊索插入在腸的頂壁之內(nèi)3.然后，脊索與內(nèi)胚層分離開(kāi)來(lái)，形成一個(gè)獨(dú)立的器官。在前方，腸管在咽部的盲端與外胚層形成的原始口腔想接觸。由外胚層和內(nèi)胚層共同形成的膜在9.0dpc

23、由于細(xì)胞死亡和細(xì)胞重新組織而破裂，從而使腸管開(kāi)口于羊膜腔中,4.隨后，在同樣的時(shí)間后腸發(fā)生，并形成泄殖腔膜。泄殖腔膜后來(lái)破裂形成肛門(mén)開(kāi)口。,第二十一節(jié) 胚外組織,1.各種胚外組織形成一個(gè)統(tǒng)一的生命支持系統(tǒng)，在子宮中維持、營(yíng)養(yǎng)并保護(hù)胚胎2.這些胚外組織形成胎盤(pán)、壁卵黃囊、臟卵黃囊以及羊膜3.胚外組織中合成蛋白質(zhì)的速率很高，用以執(zhí)行某些特定功能，包括：胎兒血清蛋白、臟內(nèi)胚層的載脂蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白等,第二十二節(jié) 胎盤(pán)的結(jié)構(gòu)與

24、功能,1.滋養(yǎng)層:分為海綿狀滋養(yǎng)層和合體滋養(yǎng)層。海綿狀滋養(yǎng)層中許多細(xì)胞是二倍體，而合體滋養(yǎng)層中大多數(shù)細(xì)胞是多倍體。兩層中都具有包含母體血細(xì)胞的血竇2.中胚層：在尿囊與絨毛膜融合以后，中胚層形成胚胎的血管。毛細(xì)血管與滋養(yǎng)層細(xì)胞交互盤(pán)繞在一起，從母體血竇中獲得營(yíng)養(yǎng)3.臟內(nèi)胚層和壁內(nèi)胚層：胎盤(pán)的裂隙中既有臟內(nèi)層也有壁內(nèi)胚層，臟內(nèi)胚層合成甲胎蛋白，壁內(nèi)胚層形成基膜,第二章 轉(zhuǎn)基因小鼠和嵌合體小鼠的生產(chǎn),緒論：要成功和高效的生產(chǎn)基因工程小鼠

25、，就必須能夠獲得大量的著床前胚胎和大量的假孕受體。此外，還必須確保動(dòng)物健康和實(shí)施合理的育種計(jì)劃。本章所描述的內(nèi)容適用于轉(zhuǎn)基因和基因打靶實(shí)驗(yàn)的鼠群，要求畜舍具備能夠控制通風(fēng)、濕度、溫度、光照的設(shè)施，具備能夠進(jìn)行籠具洗刷、飼料儲(chǔ)存、充足供水和獸醫(yī)服務(wù)等條件?？筛鶕?jù)實(shí)驗(yàn)者的實(shí)驗(yàn)需要，對(duì)我們所敘述的小鼠品系、年齡和數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)鼠群的病原控制,1.實(shí)驗(yàn)鼠群一般都應(yīng)該飼養(yǎng)在無(wú)特定病原體（SPF）的環(huán)境中2.越來(lái)越多的動(dòng)物舍被建成

26、SPF舍并實(shí)行封閉管理。一般在動(dòng)物舍，所有人員在入舍前都必須先經(jīng)過(guò)淋浴和換上無(wú)菌的裝備，所有進(jìn)入的物品都必須經(jīng)過(guò)高壓或其他方法滅菌，筆記本和其他個(gè)人物品一般不允許帶入舍內(nèi)3.所有用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的小鼠都要在規(guī)定的封閉區(qū)內(nèi)配種，所有實(shí)驗(yàn)操作都必須在舍內(nèi)進(jìn)行。在檢疫后，斷奶的幼鼠才能進(jìn)入封閉區(qū),4.有三種方法可以解決胚胎在體外操作后又移植到SPF培養(yǎng)母體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室和清潔問(wèn)題,,2.為方便對(duì)外面引進(jìn)，胚胎供體可位于封閉之外，受體在封閉區(qū)內(nèi)配種

27、，收集的胚胎在洗凈后進(jìn)入封閉區(qū)內(nèi)進(jìn)行操作,3.實(shí)驗(yàn)室位于封閉區(qū)之外，操作后的胚胎通過(guò)胚胎移植而進(jìn)入封閉區(qū),1.把實(shí)驗(yàn)室設(shè)置在封閉管理的動(dòng)物舍內(nèi)，設(shè)備、人員等都在經(jīng)過(guò)凈化后才能進(jìn)入封閉區(qū)內(nèi)。胚胎供體和受體都在封閉區(qū)內(nèi)進(jìn)行配種,5.關(guān)于SPF和非SPF鼠群應(yīng)該考慮的重要問(wèn)題包括一下5個(gè)方面,,1.飼養(yǎng)管理與存活率：SPF的小鼠更健康，存活時(shí)間更久,2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：特別是關(guān)于免疫系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，即使小鼠表面上看是健康的，病毒等感染也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,

28、3.方便性：在SPF鼠群，接觸小鼠往往程序繁瑣且費(fèi)時(shí)，必須要有周密的安排活動(dòng)時(shí)間表,4.費(fèi)用：在封閉的條件下對(duì)小鼠要求更精細(xì)的管理步驟，因而需要更多的勞動(dòng)和額外的設(shè)備,,5.小鼠品系的運(yùn)輸：從其他研究單位獲得的小鼠品系可能攜帶病原體，因而必須通過(guò)胚胎移植或者剖腹產(chǎn)重生，才能進(jìn)入SPF舍,第二節(jié) 提供供體和（或）受體小鼠的育種群,1.為提供供體小鼠和受體小鼠，應(yīng)準(zhǔn)備若干個(gè)配種鼠籠，每只籠內(nèi)放公鼠和母鼠各一只。幼鼠出生后3周齡時(shí)斷奶并把公

29、母分開(kāi)2要想盡可能多地生產(chǎn)小鼠，幼鼠應(yīng)該在下一窩小鼠出生之前斷奶，以防年齡大的踐踏年齡小的和不讓它們吃奶。一個(gè)有40~50對(duì)公母鼠的育種群，依品系不同，每周應(yīng)該生產(chǎn)20~30只母鼠3.為增加每籠產(chǎn)雌性幼鼠的數(shù)量，一個(gè)籠內(nèi)可放置2只母鼠，一只公鼠,第三節(jié) 自然交配的安排,1.獲得用于顯微鏡操作或者其他實(shí)驗(yàn)的著床前胚胎的方法之一是通過(guò)自然交配，即排卵和受精的時(shí)間完全由環(huán)境條件控制2.在恒大的光照~黑暗周期下飼養(yǎng)的磁鼠一般4~5d

30、排卵一次，時(shí)間是黑暗開(kāi)始后3~5h。3.小鼠的發(fā)情周期分為4個(gè)階段:發(fā)情前期（卵泡發(fā)育）、發(fā)情期（排卵）、發(fā)情后期（黃體形成）、發(fā)情間期（下次排卵的卵泡開(kāi)始發(fā)育，清楚上一次的卵泡細(xì)胞）4.在同樣條件下飼養(yǎng)的雄鼠將于黑暗的中點(diǎn)前后與發(fā)情(排卵)雌鼠交配。這意味著受精在排卵后1~2h發(fā)生,第三章 外科手術(shù)方法,緒論：本章所介紹的外科手術(shù)方法是進(jìn)行轉(zhuǎn)基因和生產(chǎn)嵌合體小鼠及其相關(guān)的各種試驗(yàn)研究所必需的基本手術(shù)方法。,第一節(jié) 輸精管及卵巢

31、切除術(shù),1.用切除輸精管的雄性小鼠與雌性小鼠交配，可誘導(dǎo)產(chǎn)生用于輸卵管或子宮胚胎移植的假孕受體2.發(fā)情雌鼠與不育雄鼠交配后，盡管其自身產(chǎn)生的卵母細(xì)胞已經(jīng)退化，但其子宮處于胚胎移植的接受狀態(tài)3.新形成的假孕雌鼠在11d內(nèi)不能恢復(fù)正常發(fā)情周期4摘除卵巢會(huì)引起胚胎發(fā)育停滯，故摘除卵巢后往往需要補(bǔ)充孕酮。摘除卵巢后孕鼠體內(nèi)的胚胎仍可存活10d左右。延遲發(fā)育的胚胎可用于ES細(xì)胞的生產(chǎn),第二節(jié) 胚胎移植,1.交配后0.5~3.5d形成的單細(xì)

32、胞到囊胚階段的胚胎，可以移植到假孕雌鼠的生殖道內(nèi)以使其繼續(xù)發(fā)育2.這一時(shí)期的胚胎可以移植到假孕0.5d小鼠的輸卵管壺腹部，而3.5d的胚胎可以移植到2.5或3.5d假孕雌鼠的子宮內(nèi)。2.5d比3.5d的假孕雌鼠更適合于進(jìn)行子宮胚胎移植，因?yàn)榻?jīng)過(guò)體外操作的胚胎有足夠的時(shí)間與子宮的發(fā)育相適應(yīng),第三節(jié) 剖腹產(chǎn)手術(shù)和子鼠寄養(yǎng),1.如果移植胚胎后的受體雌鼠或任何其他孕鼠，在其品系特定的預(yù)產(chǎn)期內(nèi)沒(méi)有產(chǎn)下子鼠，則很有必要實(shí)施剖腹產(chǎn)手術(shù)。難產(chǎn)尤其會(huì)

33、發(fā)生在只有1~2個(gè)胚胎著床時(shí)，由于胎兒長(zhǎng)得過(guò)大而無(wú)法正常分娩的情況下2.如果轉(zhuǎn)基因或基因突變的胎兒在分娩時(shí)死亡，為了收集到所有的胎兒用于研究，可以在18.5dpc實(shí)施剖腹產(chǎn)手術(shù),第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)方案,1.制作不育雄鼠的輸精管切除術(shù)2.誘導(dǎo)胚胎延遲著床的卵巢摘除術(shù)3.輸卵管內(nèi)胚胎移植4.子宮內(nèi)胚胎移植5.剖腹產(chǎn)手術(shù)和子鼠寄養(yǎng),6.腎囊下組織移植7.ES細(xì)胞的皮下注射8.肝臟的部分切除術(shù)9.脾切除術(shù)10.腎切