小鼠胚胎的玻璃化冷凍技術(shù)研究.pdf

1、該試驗(yàn)探討了冷凍保護(hù)劑基礎(chǔ)液、冷凍載體的選擇及不同玻璃化冷凍方法對(duì)小鼠3.5d~4d桑椹胚和囊胚的冷凍保存效果.(1)玻璃化液分別使用TCM-199和D-PBS為基礎(chǔ)液,在基礎(chǔ)液中添加10％ EG+10％ DMSO為玻璃化1液(VS1),添加20％ EG+20％DMSO為玻璃化2液(VS2),冷凍小鼠桑椹胚和解凍后獲得的發(fā)育率分別為70.00％和72.34％,二者差異不顯著(p>0.05);(2)使用玻璃管和塑料管作為胚胎的承載材料進(jìn)行

2、玻璃化冷凍效果比較,玻璃材質(zhì)的OPS管玻璃化冷凍桑椹胚,解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為95.23％和87.57％,而使用塑料OPS管玻璃化冷凍桑椹胚解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為89.66％和86.40％;玻璃材質(zhì)的OPS管玻璃化冷凍囊胚,解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為92.00％和85.83％,而使用塑料OPS管玻璃化冷凍桑椹胚解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為86.84％和77.14％,使用玻璃OPS管和使用塑料OPS管在胚胎解凍后形態(tài)

3、正常率和發(fā)育率上差異均不顯著(p>0.05);(3)采用程序化冷凍與OPS玻璃化冷凍法進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果使用玻璃化冷凍法和程序化冷凍法對(duì)小鼠胚胎進(jìn)行冷凍保存都可以取得很好的結(jié)果.程序化冷凍在形態(tài)正常率桑椹胚97.78％,高于玻璃化冷凍94.64％,囊胚為95.12％,低于玻璃化冷凍100％.在發(fā)育率方面,程序化冷凍桑椹胚解凍后發(fā)育率為95.45％,玻璃化冷凍法為88.94％,差異顯著(p<0.05);程序化冷凍囊胚解凍后發(fā)育率為86.16％

4、,玻璃化法為83.33％,差異不顯著(p>0.05);(4)使用OPS細(xì)管進(jìn)行玻璃化冷凍桑椹胚,解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為97.01％和86.91％,0.25ml細(xì)管冷凍桑椹胚,解凍后胚胎形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為91.84％和75.51％,差異不顯著(p>0.05);使用OPS細(xì)管進(jìn)行玻璃化冷凍囊胚,解凍后形態(tài)正常率和發(fā)育率為88.46％和83.51％,0.25ml細(xì)管冷凍囊胚,解凍后胚胎形態(tài)正常率和發(fā)育率分別為75.47％和68.