皂苷和強(qiáng)心苷

1、教學(xué)目的與要求,1.熟悉皂苷、強(qiáng)心苷的主要結(jié)構(gòu)類型及理化性質(zhì)2.掌握皂苷、強(qiáng)心苷的顏色反應(yīng)及其應(yīng)用3.掌握強(qiáng)心苷的酸水解法和酶水解法及其應(yīng)用4.熟悉皂苷、強(qiáng)心苷的一般提取分離方法5.了解皂苷、強(qiáng)心苷的波譜特征,經(jīng)典含義——存在于植物體內(nèi)一類比較復(fù)雜的苷類 化合物，其水溶液振搖后可產(chǎn)生持久 的肥皂樣泡沫， 因此而得名?，F(xiàn)代含義——

2、螺甾烷以及與其生源途徑相似的甾族化 合物的低聚糖苷或三萜類化合物的低聚 糖苷。,第一節(jié) 皂苷,一、皂苷的分類及結(jié)構(gòu)特點(diǎn),皂苷,甾體皂苷,三萜皂苷,螺甾烷醇型 : 25 S (L)（C25-甲基直立a鍵、 為β型） 異螺甾烷醇型 : 25 R (D) ( C25-甲基平

3、伏e 鍵、為 ? 型)變形螺甾烷醇型 ：F環(huán)變形為呋喃甾烷（五 元含氧環(huán)）呋甾烷型 ：F環(huán)裂環(huán),C26-OH多與葡萄糖相 連成苷,四環(huán)三萜皂苷,五環(huán)三萜皂苷,達(dá)瑪甾烷型 羊毛脂甾烷型,β-香樹脂烷型(齊墩果烷型 )? -香樹脂烷型（烏蘇烷型 ） 羽扇豆烷型,

4、,,,,,(一)甾體皂苷1、甾體皂苷的結(jié)構(gòu)特征 ：,甾體皂苷由 甾體皂苷元與糖（?-羥基糖）縮合而成。甾體皂苷元由27個(gè)碳原子、六個(gè)環(huán)組成，其基本碳架是螺甾烷的衍生物。,A,B,C,D,E,F,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,（3）C25的絕對(duì)構(gòu)型依其上甲基的取向不同有兩種：C-25甲基是β-構(gòu)型稱為螺甾烷[絕對(duì)構(gòu)型為

5、L(S)型]，C-25甲基是?-構(gòu)型稱為異螺甾烷[絕對(duì)構(gòu)型為D (R) 型]。,（1）甾體皂苷元中有六個(gè)環(huán)，A、B、C、D四個(gè)環(huán)具有甾體母核結(jié)構(gòu),C-22是螺原子,E、F環(huán)以螺縮酮形式連接。,（2）A、B環(huán)有順、反兩種稠合方式。B、C環(huán)和C、D環(huán)均為反式稠合。,C25-甲基,,直立a鍵、為β型 L型 (25S 25L 25β),平伏e鍵、為 ?型 D型（ 25R 25D 25? ),,螺甾烷型,,異螺甾烷型,(4)

6、取代基團(tuán)：OH 多在C3-位或其他位置,且多為β-型羰基 多在C12-位雙鍵 多在△5 , △9（11）,少數(shù)在△25（27）位甾體皂苷不含羧基，呈中性，故稱為中性皂苷。,,,(5)常見的糖有: D-葡萄糖、D-半乳糖、 D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸等較為常見,此外也可見到夫糖和加拿大麻糖及6-去氧葡萄糖和6-去氧半乳糖。,(6)成苷的位置:與苷元C-3上的羥基

7、連接成苷,也有在C-1 或C-26位置上成苷的。,2.甾體皂苷苷元的結(jié)構(gòu)類型,異螺甾烷醇型,螺甾烷醇型,變形螺甾烷醇型,呋甾烷醇型,（1）三萜皂苷苷元為30個(gè)碳原子組成的三萜類衍生 物,大多數(shù)在24或28位有羧基,故又稱酸性皂苷。（2）常見的糖有D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L- 阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛 酸，另外還有D-呋糖、D-雞納糖、D-芹糖、乙酰基

8、 和乙酰氨基糖等。（3）成苷的位置多為3位醇皂苷或28位酯皂苷；另外 也有16、21、23、29位等醇羥基成苷。（4）常見的三萜皂苷有單糖鏈三萜皂苷、雙糖鏈三 萜皂苷和三糖鏈皂苷,(二) 三萜皂苷,1、三萜皂苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),2、三萜皂苷元的結(jié)構(gòu)類型：常見的有四環(huán)三萜皂苷和 五環(huán)三萜皂苷。,（1）四環(huán)三萜皂苷元:

9、其基本骨架也是甾體結(jié)構(gòu)母核， A/B、B/C、C/D環(huán)均為反式稠合。,羊毛脂甾烷型,達(dá)瑪甾烷型,β-香樹脂烷型又稱齊墩果烷型A/B、B/C、C/D環(huán)為反式稠合D/E環(huán)為順式稠合,?-香樹脂烷型又稱烏蘇烷型 A/B、B/C環(huán)為反式稠合C/D 、D/E環(huán)為順式稠合,（2）五環(huán)三萜皂苷元類型,羽扇豆烷型A/B、B/C、C/D、D/E 環(huán)均為反式稠合,木栓烷型A/B、B/C、C/D、D/E 環(huán)均為反

10、式稠合,二、皂苷的理化性質(zhì),1、性狀 皂苷大多為無色或乳白色無定形粉末（低聚糖 苷，極性大，分子量大）；皂苷元（極性小）大多有完好結(jié)晶；皂苷多數(shù)具有苦而辛辣味，對(duì)粘膜有強(qiáng)烈刺激 性，尤其鼻粘膜，易引起噴嚏 。皂苷大多具吸濕性。,2、溶解性 皂苷（低聚糖苷，極性大）易溶于水、稀醇、含水丁醇， 難溶于丙酮、乙醚等； 次生皂苷（極性降低） 易溶于醇、丙酮、乙酸乙酯等；

11、 皂苷的助溶作用（表面活性劑作用），可以增大其他成分在水中的溶解度。,,3、表面活性 皂苷水溶液經(jīng)強(qiáng)烈振搖能產(chǎn)生大量持久性泡沫，且不因加熱而消失。原因：皂苷分子中 糖——親水性 苷元——親脂性 降低水溶液表面張力作用所致，但也有些皂苷起泡性不明顯。三萜皂苷酸水液的泡沫和堿水液的泡沫持續(xù)時(shí)間相同甾體皂苷堿水液泡沫比酸水液的泡沫持續(xù)

12、時(shí)間長(zhǎng)幾倍,4、溶血作用,（1）溶血性 ：皂苷的水溶液能破壞紅血球而有溶血作用。但F環(huán)開環(huán)的皂苷沒有溶血性。（2）溶血指數(shù)：皂苷對(duì)同一來源的紅細(xì)胞稀懸浮液，在一定條件下（相同pH、等滲、恒溫等）造成完全溶血的最低濃度。 例如 薯蕷皂苷的溶血指數(shù)為1：400000， 甘草皂苷的溶血指數(shù)為1：4000。,（3）溶血原因 多數(shù)皂苷 + 紅細(xì)胞壁上的膽甾醇→不溶性復(fù)合物↓ 破壞血紅細(xì)胞

13、的正常滲透性 使細(xì)胞內(nèi)滲透壓增加而崩裂,5、與金屬鹽的沉淀反應(yīng),酸性皂苷 + 中性鹽（硫酸銨、醋酸鉛）→ 沉淀酸性皂苷 + 堿性醋酸鉛 → 沉淀中性皂苷 + 堿性醋酸鉛、氫氧化鋇 → 沉淀應(yīng)用：分離兩種皂苷,6、與膽甾醇的沉淀反應(yīng)： 皂苷與膽甾醇可形成 分子復(fù)合物的沉淀。生成的分子復(fù)合物沉淀 用乙醚回流提取時(shí)，膽甾醇可溶于乙醚， 皂苷不溶。沉淀規(guī)律如下:,①凡有3β-OH，A/B環(huán)反

14、式稠合(5?-H)或Δ5的 平展結(jié)構(gòu)的甾醇，與皂苷形成的分子復(fù)合物的 溶度積最小。 ②凡有3?-OH或3β-OH經(jīng)酯化或成苷的甾醇， 不能與皂苷形成難溶性分子復(fù)合物。 ③三萜皂苷與甾醇形成的分子復(fù)合物的穩(wěn)定性 低于甾體皂苷與甾醇形成的分子復(fù)合物。,皂苷在無水條件下可與強(qiáng)酸、中等強(qiáng)酸、Lewis酸等作用下發(fā)生顏色反應(yīng)：醋酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)） 黃

15、 紅 紫 藍(lán) 褪色 黃 紅 紫 藍(lán) 綠色 褪色五氯化銻反應(yīng)（Kahlenberg反應(yīng)）三氯醋酸反應(yīng)（Rosen-Heimer反應(yīng)）氯仿-濃硫酸反應(yīng)（Salkowski反應(yīng)）冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)（Tschugaeff反應(yīng)）,,,,,,,,,,7、皂苷的顏色反應(yīng),三、皂苷的提取分離甾體皂苷——主要作為

16、合成激素等的原料，故以 提取苷元較為實(shí)用。三萜皂苷——為許多中藥的有效活性成分，故以 提取原生苷為主。（一）皂苷苷元的提取與分離,,,方法1,原才料,加水，36℃保溫24~48小時(shí)浸泡預(yù)發(fā)酵,3%硫酸加熱水解3~6小時(shí)，過濾，水洗，干燥,1、皂苷苷元的提取,料渣,,,料渣,石油醚、或甲苯連續(xù)回流4~6小時(shí)提取,提取液,適當(dāng)回收溶劑，放置析晶，

17、抽濾,皂苷元粗品,,乙醇或丙酮處理，活性炭脫色重結(jié)晶,皂苷元,,,,,方法2.,原材料,稀醇水溶液提取,皂苷,兩相酸水解法、酶水解、smith降解法,水解液,皂苷元,苯、氯仿等有機(jī)溶劑萃取,萃取液,回收溶劑,色譜分離法吸附原理： 硅膠、氧化鋁苯-氯仿、苯-甲醇、氯仿-甲醇不同比例洗脫,2、皂苷苷元的分離,（二）皂苷的提取與分離,n-BOH(皂苷) 水(水溶性雜質(zhì)）,,,,,,,,,,,,1、皂苷的提?。?原材料,

18、稀醇提取,乙醇液,料渣,濃縮后，石油醚-水萃取,石油醚 水,n-BOH萃取,,水洗 30%乙醇 50%乙醇 70%乙醇,,,,,,,,TLC檢查皂苷，合并洗脫液，濃縮， 醇溶+丙酮（乙醚）→ 皂苷沉淀(醇/丙酮法),n-BOH(皂苷),濃縮,濃縮液,大孔吸附樹脂,2、皂苷的分離（分配色譜）：正相柱層析 支持劑：硅膠

19、 固定相：水 流動(dòng)相：氯仿：甲醇：水 CH2Cl2:甲醇：水反相柱層析 固定相：RP-18、RP-8 、RP-2 流動(dòng)相：甲醇：水，乙腈：水,試劑類型 鑒別特點(diǎn) 鑒別意義,用于兩類皂苷的區(qū)別,,四、皂苷的檢識(shí)及結(jié)構(gòu)測(cè)定,（一） 皂苷的化學(xué)檢識(shí) —— 顏色反應(yīng),醋酐-濃硫酸反應(yīng)

20、,甾體皂苷最后呈藍(lán)綠色,三萜皂苷最后顯紅或紫紅色,三氯醋酸反應(yīng),三萜皂苷加熱至100 ℃ 才顯色,用于兩類皂苷的區(qū)別,,甾體皂苷加熱至60℃即可顯色,鹽酸-對(duì)二甲氨基苯甲醛 （Ehrlich試劑，簡(jiǎn)稱 E試劑）,螺甾烷醇類 皂苷不顯色,呋甾烷醇類皂苷顯紅色,茴香醛-硫酸 (Anisaldehyde, 簡(jiǎn)稱A試劑）,螺甾醇類 皂苷顯黃色,,呋甾醇類皂苷顯黃色,,可用于兩類不同苷元皂苷的區(qū)別,可用于兩類不同苷元

21、皂苷的區(qū)別,官能團(tuán) （λmax） 孤立雙鍵 205~225nm（ε900） 羰基 285nm（ε500） a、β- 不飽和酮基 240nm（ε11000）飽和的甾體皂苷元與共軛雙鍵

22、 235nm濃硫酸 40℃，1hr 220 ~ 275nm,（二）波譜特征檢識(shí),1、紫外特征（UV ）,飽和的甾體皂苷元 紫外區(qū)無吸收,依吸收峰的位置（λmax）及吸光系數(shù)（ε）與標(biāo)準(zhǔn)圖譜相對(duì)照，即可用于不同皂苷元的鑒別,甾體皂苷的螺縮酮結(jié)構(gòu)在紅外光譜的指紋區(qū)表現(xiàn)特征性四個(gè)吸收峰：,2．紅外光譜（IR）,可用于C- 25構(gòu)型的鑒別（兩種皂苷元的鑒別）,25

23、 D (R)系： 980 cm-1 ( A ) 、920 cm-1 ( B ) 、 900 cm-1 ( C ) 、 860 cm-1 ( D ); 其中A帶最強(qiáng)，C帶較B帶強(qiáng) 3~4倍,25L(S)系： 980 cm-1 (A) 、920 cm-1 (B) 、 9900 cm-1 (C) 、 860 cm-

24、1 (D); 其中A帶最強(qiáng)， B帶較C帶強(qiáng)2倍,當(dāng)F環(huán)開裂，無螺縮酮結(jié)構(gòu)，無此特征。,當(dāng)甾環(huán)11或12位有羰基時(shí),則在1751~1705cm-1處只有一個(gè)吸收峰；且11位羰基的吸收頻率比12位羰基的高。若12位羰基形成?，β-共軛體系，則在1605~1600cm-1（雙鍵）及1697~1673cm-1 （羰基）處各有一個(gè)吸收峰,甾體皂苷的螺縮酮結(jié)構(gòu) 139（基峰）、115（中）、

25、126（弱）若C25-OH 或 C27-OH +16 155（基峰）、131（中）、 142（弱） OH乙?；疧Ac +58 197（基峰） OH甲基化OMe +30 169（基峰）若△25（27） -2 137（基峰）、113（中）、124（弱）若C17 ?– OH 13

26、9減弱、126（基峰）、155、153二個(gè)峰,推斷F - 環(huán)的取代情況,3.質(zhì)譜（MS）,m/z 139（基峰） m/z 115（中） m/z 126輔助離子,m/z 137 m/z 113 m/z 124,五環(huán)三萜皂苷在12位和13位間有一雙鍵，具有環(huán)己烯的結(jié)構(gòu)，很容易發(fā)生RDA（逆Diels-Alder）裂解，將分子分為兩大碎片。根據(jù)生成的

27、碎片離子峰可以確定A、B環(huán)及D、E環(huán)上取代的性質(zhì)、數(shù)目幾位置。,1HNMR特征：在高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 18、19、21、27-CH3的信息特征；,,4、核磁共振,δ 1.10 (25 S、 L-型),δ 0.7 (25R、 D-型),依δ27-H D、 L - 構(gòu)型判斷,,21- CH3 3H d 27- CH3 3H d,18- CH3 3H s

28、19- CH3 3H s,18- CH3處于較高場(chǎng),,27- CH3處于較高場(chǎng),（2）在低場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)C16 – H C26-2H的信息特征， 而且，依C26-2H化學(xué)位移的差值（△δ）可用于D、 L - 構(gòu)型的判斷C26-2H D-型：（25R)3.3、3.95 ；L-型 （25 S) 3.36,（3）結(jié)構(gòu)中的許多亞甲基、次甲基質(zhì)子堆積成復(fù)雜峰圖,△δ相近 ： L-型 （25 S),△δ相差比較大： D

29、-型：（25R)3.3,13CNMR : 碳譜寬度比氫譜寬30倍，分子微小差異 即可引起碳譜化學(xué)位移的區(qū)別，并可利用全氫去 偶、偏共振去偶、高分辨碳譜等得到的信息參數(shù) 幾乎可以將皂苷元分子27個(gè)碳原子（包括季碳、 羰基碳原子）的特征峰全部辨認(rèn)出來。甾體皂苷元碳譜特征及位移規(guī)律：21、18、19、27-甲基碳原子δ在 20ppm以下16-碳原子 δ在80ppm左右26-碳

30、原子 δ在109ppm左右雙鍵碳原子 115~150ppm羰基碳原子 200ppm左右碳原子被含氧基團(tuán)取代， δ+40~45ppm,含義: 是指存在于植物體內(nèi)的一類對(duì)心臟具有顯 著生物活性的甾體苷類化合物。,第二節(jié) 強(qiáng)心苷類,,一、 強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)與分類（一）苷元部分：為甾體衍生物。其結(jié)構(gòu)特征為：1.甾體母核的四個(gè)環(huán)為順-反-順的稠合方式2.苷元的3-位、14-位常連有羥基，且多為β-

31、型3.甾體母核的C17 -位上連接不飽和內(nèi)酯環(huán),依據(jù)內(nèi)酯環(huán)大小的不同，強(qiáng)心苷元可分為,強(qiáng)心甾烯甲型強(qiáng)心苷元,海蔥甾烯（蟾蜍甾二烯）乙型強(qiáng)心苷元,強(qiáng)心甾烯,海蔥甾烯（蟾蜍甾二烯）,3β-OH 14β-OH,3β-OH 14β-OH,,,甲型強(qiáng)心苷元,乙型強(qiáng)心苷元,甲型強(qiáng)心苷,乙型強(qiáng)心苷,3 -位連接糖基,3-位連接糖基,,,1.糖的類型 :構(gòu)成強(qiáng)心苷的糖有20多種,根據(jù)C2上有無羥基可分為?-羥基糖(2-羥基糖)和? -去氧

32、糖(2-去氧糖)。 ? -去氧糖(2-去氧糖)常見于強(qiáng)心苷,是區(qū)別于其它苷類成分的一個(gè)重要特征。 (1) ? -OH糖：除D-葡萄糖、L-鼠李糖外還有6-去氧 糖如L-夫糖、D-雞納糖、D-弩箭子糖、D-6去氧 阿洛糖；6-去氧糖甲醚如L-黃花夾竹桃糖、D-洋 地黃糖等 (2) ? -去氧糖：2、6-二去氧糖，如D-洋地黃毒糖； 2、6-二去氧糖甲醚，如L-夾竹

33、桃糖、D-加拿大 麻糖、D-迪吉糖和D-沙門糖等,,,（二）糖基部分,2、常見糖的結(jié)構(gòu)：,L-鼠李糖,L-夫糖,D-雞納糖,D-葡萄糖,L-黃花夾竹桃糖,D-弩箭子糖,D-6-去氧阿洛糖,L -夾竹桃糖2,6-二去氧糖,D-加拿大麻糖,D-迪吉糖,D-洋地黃毒糖,D-沙門糖,D-洋地黃糖,（三）苷元和糖的連接方式,I型強(qiáng)心苷 苷元-(2、6-二去氧糖)Χ-(D-葡萄糖)У II型強(qiáng)心苷 苷元-(6-去氧糖)Χ –

34、 (D-葡萄糖)УIII型強(qiáng)心苷 苷元- (D-葡萄糖) У,強(qiáng)心苷大多是低聚糖苷，少數(shù)是單糖苷或雙糖苷。通常按糖的種類和苷元的連接方式，可分為以下三種類型：,自然界存在的強(qiáng)心苷以Ⅰ、Ⅱ型較多, Ⅲ型較少。,x=1~3，y=1~2,1．性狀：大多為無色結(jié)晶或無定形粉末 。具有 旋光性。味苦，對(duì)粘膜有刺激性。 2．溶解性,,二、強(qiáng)心苷的理化性質(zhì),水解特點(diǎn) :苷元與?-去氧糖及 ?- 去氧糖與? -

35、去氧糖 之間 的苷鍵開裂 ,不會(huì)引起苷元脫水。,3、水解反應(yīng),(1) 酸水解,①溫和酸水解,水解條件:0.02~0.05mol/L HCl或H2SO4在含水醇溶液中 短時(shí)加熱,用 途:Ⅰ型強(qiáng)心苷水解為苷元和糖。,水解條件: 3~5% HCI,延長(zhǎng)加熱時(shí)間或加壓 水解特點(diǎn): 所有苷鍵斷裂 用途: I 、 II、III型強(qiáng)心苷的水解 此法易產(chǎn)生脫水苷元

36、③氯化氫-丙酮法 水解條件: 1% HCl丙酮溶液20℃放置兩周 水解特點(diǎn): 糖分子中的C2和C3羥基與丙酮反應(yīng)生成丙 酮化物,進(jìn)而水解可得到原生苷元和糖衍生物 用途:II型強(qiáng)心苷的水解,②強(qiáng)烈酸水解,+,鈴蘭毒苷,丙酮縮鈴蘭毒苷,毒毛旋花子苷元,氯代丙酮縮 L-鼠李糖,水解條件：水、36℃左右、24 hr水解特點(diǎn)：專屬

37、性強(qiáng)，不同性質(zhì)的酶，作用于不同性質(zhì) 的苷鍵 。乙型強(qiáng)心苷比甲型強(qiáng)心苷易水解 植物體內(nèi)只有水解葡萄糖的酶，無水解?-去氧糖的酶。酶能水解除去葡萄糖，保留?-去氧糖而生產(chǎn)次生苷。苷元類型不同，被酶水解的難易程度也不同，一般來說乙型強(qiáng)心苷比甲型強(qiáng)心苷易水解。用途：研究強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)。,（2）酶水解,（3）堿水解,強(qiáng)心苷的苷鍵不被堿水解，但分子中的?；?nèi)酯環(huán)會(huì)受堿的影響，發(fā)生水解或裂解、雙

38、鍵位移、苷元異構(gòu)化等反應(yīng)。,①?；膲A水解水解條件： NaHCO3 、KHCO3、 Ca (OH)2、Ba (OH)2 水解特點(diǎn)：NaHCO3和KHCO3主要使2-去氧糖上的酰 基水解，而2-羥基糖或苷元上的酰基不水解； 而Ca(OH)2和Ba(OH)2可使2-去氧糖、 2-羥基 糖及苷元上的?；猓珒?nèi)酯環(huán)不水解。

39、 應(yīng)用：鑒別2-去氧糖和2-羥基糖或苷元,②內(nèi)酯環(huán)的堿水解,在水溶液中KOH和NaOH可使內(nèi)酯環(huán)開裂，加酸后可再環(huán)合； 在醇溶液中KOH和NaOH可使內(nèi)酯環(huán)開裂后生成異構(gòu)化苷，酸化也不能再環(huán)合為原來的內(nèi)酯環(huán)，是不可逆反應(yīng)。,,,甲型強(qiáng)心苷在KOH醇溶液中通過內(nèi)酯環(huán)的電子轉(zhuǎn)移、雙鍵移位，雙鍵由20（22）轉(zhuǎn)移到20（21），生成C22活性亞甲基，以及C14位羥基質(zhì)子對(duì)C20位的雙鍵親電加成

40、反應(yīng)而生成內(nèi)酯型異構(gòu)化苷，再經(jīng)皂化開環(huán)形成開鏈型異構(gòu)化苷。,應(yīng)用：與活性亞甲基試劑反應(yīng)，用于鑒別甲型和乙型 強(qiáng)心苷。,乙型強(qiáng)心苷在KOH醇溶液中不發(fā)生雙鍵位移，但內(nèi)酯環(huán)開裂生成甲酯異構(gòu)化苷。,4、脫水反應(yīng),(D-洋地黃毒糖)3,強(qiáng)心苷用混合強(qiáng)酸（如3~5% HCl或H2SO4）進(jìn)行酸水解時(shí)，苷元往往發(fā)生脫水反應(yīng)。C3-、C14-上的β-OH最容易發(fā)生脫水。,HCl,3D-洋地黃毒糖,+,Δ,羥基洋地黃毒

41、糖苷,脫水羥基洋地黃毒苷元,——水解反應(yīng)的副反應(yīng)，應(yīng)注意避免,5、顯色反應(yīng)：由甾體母核、不飽和內(nèi)酯環(huán)和 ?-去氧糖三部分產(chǎn)生。,（1）作用于甾核的顏色反應(yīng) ①醋酐-濃硫酸（L-B）反應(yīng) ②Salkowski（氯仿-濃硫酸）反應(yīng) ③三氯醋酸-氯胺T(Rosenheim)反應(yīng) ④三氯化銻（五氯化銻）反應(yīng),,（2）作用于五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的顏色反應(yīng) 甲型強(qiáng)心苷C17側(cè)鏈上的五元不飽和內(nèi)

42、酯環(huán)在堿性溶液中雙鍵轉(zhuǎn)移形成活性亞甲基,該活性亞甲基能與某些試劑反應(yīng)而顯色。反應(yīng)在可見光區(qū)有最大吸收，也可用于定量分析；乙型強(qiáng)心苷在堿性溶液中無此類反應(yīng)。,Legal反應(yīng),Kedde反應(yīng),Raymand反應(yīng),Baljet反應(yīng),反應(yīng)名稱 試劑 顏色 λmax,Na2Fe(NO)CN5·2H2O亞硝酰鐵氰化鈉,深紅或藍(lán),4

43、70nm,3,5-二硝基苯甲酸,深紅或紅,590nm,間-二硝基苯,紫紅或藍(lán),苦味酸,橙或橙紅,620nm,490nm,此類反應(yīng)可在試管內(nèi)進(jìn)行，也可以作為TLC或PC的顯色劑。用于甲型與乙型強(qiáng)心苷的鑒別,（3）作用于?-去氧糖的顏色反應(yīng)①Keller-Kiliani（K-K）反應(yīng)：將強(qiáng)心苷溶于含少量 Fe3+的冰醋酸，沿試管壁滴加濃硫酸，醋酸層漸呈 藍(lán)色或藍(lán)綠色，界面處隨苷元不同顯不同顏色。,②對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)：將

44、強(qiáng)心苷的醇溶液滴在濾紙 上，干后噴1%對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液-濃鹽酸(4:1), 并于90℃加熱30秒，顯灰紅色斑點(diǎn)。,③過碘酸-對(duì)硝基苯胺反應(yīng):過碘酸能將2-去氧糖氧化生 成丙二醛,再與對(duì)硝基苯胺縮合而顯黃色。,三、 強(qiáng)心苷的提取分離,強(qiáng)心苷提取分離比較困難，原因： 1. 含強(qiáng)心苷成分比較復(fù)雜，且含量較低；2. 強(qiáng)心苷為多糖苷, 常與多糖、皂苷、色素、鞣質(zhì) 等性質(zhì)相近成分共存； 3. 共存酶

45、的存在及酸、堿等，易造成強(qiáng)心苷的水解，使成分復(fù)雜化；,（一）強(qiáng)心苷的提?。?原生苷和次生苷，在溶解性上有親水性、弱親脂性、親脂性之分，但均能溶于甲醇、乙醇中。一般常用甲醇或70~80%乙醇作溶劑，提取效率高，且能使酶失去活性。,1、提取——溶劑法（相似者相溶原理）： 原生苷： 甲醇、乙醇 次生苷： 乙醚、氯仿、氯仿-甲醇混合溶劑,2、除雜 溶劑法: 油脂類雜質(zhì)，先用壓榨法或石油醚脫脂靜置析膠法：將

46、醇提液濃縮至適當(dāng)醇濃度后靜置， 使葉綠素等脂溶性雜質(zhì)成膠狀沉淀析出 后，過濾除去； 吸附法: 活性炭可除去葉綠素等脂溶性雜質(zhì)；氧化鋁 可除去糖類、水溶性色素、皂苷等雜質(zhì)，注 意調(diào)整醇濃度，避免強(qiáng)心苷被吸附而損失。,3、分離純化

47、 兩相溶劑萃取法：依分配系數(shù)差異（K）逆流分溶法： 依分配系數(shù)差異（K）液滴逆流分溶法（DCCC）: 依分配系數(shù)差異（K）色譜分離法：親脂性苷（單糖苷、次生苷、苷元）采 用吸附色譜，一般用硅膠為吸附劑，正己烷-乙酸乙 酯、苯-丙酮、氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇為溶劑進(jìn)行 梯度洗脫；弱親脂性苷（原生苷）：選用分配色譜， 用硅膠、硅藻土、纖維素為支持劑，甲酰胺、二甲基 甲酰胺為

48、固定相，以乙酸乙酯-甲醇-水或氯仿-甲醇- 水進(jìn)行梯度洗脫。 當(dāng)組分復(fù)雜時(shí)，往往需幾種方法配合應(yīng)用反復(fù)分離，才能達(dá)到滿意的分離效果。,四、強(qiáng)心苷的檢識(shí),（一） 理化檢識(shí) ：主要是利用其分子結(jié)構(gòu)中甾體母核、不飽和內(nèi)酯環(huán)、?-去氧糖的顏色反應(yīng)。常用的有Liebermann-Burchard反應(yīng)、Keller-Killiani反應(yīng)、Legal反應(yīng)和Kedde反應(yīng)等。 若樣品的顯色反應(yīng)表明

49、有甾體母核和?-去氧糖，則基本可判定樣品含強(qiáng)心苷；若Legal反應(yīng)或Kedde反應(yīng)也呈陽性，則表明樣品所含成分屬于甲型強(qiáng)心苷類；反之則可能是乙型強(qiáng)心苷類。,（二）色譜檢識(shí)：,1、紙色譜檢識(shí)：①親脂性強(qiáng)的強(qiáng)心苷：以甲酰胺或丙二醇為固定相，以苯或甲苯（用固定相飽和）為流動(dòng)相②親水性強(qiáng)的強(qiáng)心苷：以水浸透濾紙為固定相，以水飽和的正丁醇或乙醇-甲苯-水（4:6:1）、氯仿-甲醇-水(10:2:5、10:4:5、10:8:5）為流動(dòng)

50、相,2、薄層色譜檢識(shí):① 吸附TLC：硅膠為吸附劑，氯仿-甲醇-冰醋酸（85:13:2）、二氯甲烷-甲醇-甲酰胺(80:19:1)、乙酸乙酯-甲醇-水(8:5:5)等溶劑系統(tǒng)為展開劑②分配TLC(反相硅膠):以硅藻土、纖維素為支持劑，以甲酰胺、二甲基甲酰胺或丙二醇為固定相，氯仿-丙酮（4:1）、氯仿-正丁醇(19:1)等容積系統(tǒng)展開。,常用顯色劑：,①2%的3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液與2mol/LKOH溶液 等體積

51、混合。②1%的苦味酸水溶液與10%NaOH水溶液（95:5）混合 噴后于90~100℃烘4~5分鐘。③2%三氯化銻的氯仿溶液,噴后與100 ℃烘5分鐘,各種 強(qiáng)心苷及苷元顯示不同顏色。,五、強(qiáng)心苷的波譜特征,（一） 紫外光譜,用于甲型與乙型強(qiáng)心苷及苷元的鑒別,,λmax 295 ~ 300nm ( lgε 3.93 ),λmax 217~220nm ( lgε 4.20~4.24),若甲型強(qiáng)心苷分子中有Δ16(17

52、)與內(nèi)酯環(huán)共軛則λmax紅移至270nm,若分子中有Δ 14(15),16(17)雙烯與內(nèi)酯環(huán)共軛則λmax紅移至330nm,強(qiáng)心苷的不飽和內(nèi)酯的羰基在1800~1700cm-1 產(chǎn) 生特征性兩個(gè)羰基吸收峰。甲型強(qiáng)心苷和乙型強(qiáng) 心苷吸收強(qiáng)度和峰位是不同的。,多一個(gè)共軛雙鍵,兩吸收峰向低波數(shù)位移40cm-1,高波數(shù)的非正常吸收峰也隨溶劑極性的增大而減弱甚至消失,低波數(shù)區(qū)的強(qiáng)吸收是羰基的正常吸收;高波數(shù)區(qū)的弱吸收是

53、非正常吸收,且隨溶劑極性增大而減弱甚至消失,(二) 紅外光譜,甲型強(qiáng)心苷,乙型強(qiáng)心苷,1、1H-NMR譜,(三) 核磁共振譜,（1）H-3為多重峰，約在δ3.9處，若成苷后向低場(chǎng)位移,（2）強(qiáng)心苷元的18-CH3和19-CH3在1.0左右均以單峰形式有特征吸收峰，一般18-CH3比19-CH3位于較低場(chǎng)。若C10上連有羥甲基，則在高場(chǎng)區(qū)僅有18-CH3的單峰，在低場(chǎng)區(qū)則出現(xiàn)一個(gè)19-CH2 OH的信號(hào)，該羥基酯化后更向低場(chǎng)位移

54、，一般在δ4.0~4.5區(qū)域內(nèi)呈AB型四重峰，若C10上連有醛基時(shí)則雜δ9.5~10.0區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)醛基質(zhì)子的單峰。,（3）甲型強(qiáng)心苷：C21上兩個(gè)質(zhì)子在δ4.5~5.0處以寬單 峰或三重峰或AB型四重峰(J=18Hz)，C22上的烯質(zhì) 子在δ5.6~6.0處以寬單峰出現(xiàn)。 乙型強(qiáng)心苷： C21上的質(zhì)子以單峰出現(xiàn)在δ7.2左 右，22-H和23-H

55、各以二重峰形式分別出現(xiàn)在δ7.8 和δ6.3左右。,2、13C-NMR譜：強(qiáng)心苷甾體母核上個(gè)類碳的δ值范圍,碳的類型 δ值范圍 碳的類型 δ值范圍 伯碳 12~24 醇碳 65~91 仲碳 20~41 烯碳