綜合實訓革蘭陰性需氧和兼性需氧桿菌

1、革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌,xiaobinxuer@163.com,革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌,革蘭陰性桿菌,O-F試驗,F,－,,,,o/－,非發(fā)酵菌,氧化酶試驗,+,弧菌科,腸桿菌科,革蘭陰性菌初步分群,乳糖發(fā)酵試驗,A腸桿菌科共同特性,1、相似的形態(tài)染色 中等大小，G –桿菌，無芽胞，多數(shù)有動力,2、簡單的培養(yǎng)條件,3、活潑的生化反應,初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌,腸道致病菌,腸道非致病菌,不發(fā)酵乳糖,發(fā)酵乳糖,,,A腸桿菌科

2、的鑒別,1、形態(tài)觀察（革蘭染色） G –桿菌2、菌落觀察（1）埃希菌在腸道 選擇性培養(yǎng)基上發(fā)酵乳糖產酸，在SS和MAC平板上為紅色或粉紅色菌落(2)志賀菌屬：將本菌接種在SS和MAC平板上經35℃孵育18～24h。由于志賀菌不分解乳糖，宋內志賀菌某些菌株可遲緩發(fā)酵乳糖，故其在SS平板和MAC平板上形成無色透明的、中等大小的菌落。除宋內志賀菌菌落外均為光滑型菌落。 (3)沙門菌屬：將本菌接種在SS、MAC平板上經35℃孵育18～2

3、4h。由于本菌不分解乳糖并產堿，故在SS和MAC平板上形成無色、半透明、光滑濕潤、凸起的小菌落，產生H2S的菌落可在SS平板上形成中心帶黑褐色的小菌落。3、生化反應4、血清學實驗,革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛。發(fā)酵多種糖類，多數(shù)能發(fā)酵乳糖，產酸產氣 IMViC試驗為+ + - -，MIU:++-, KIA:AA+-不產H2S大腸桿菌血清型以O：K：H,A1埃希菌,能分解葡萄糖，產酸不產氣，不分解乳糖,除宋內志賀菌

4、IMViC試驗為-+ - -，MIU:---, KIA:KA--,不產H2S,是人類細菌性痢疾最為常見的病原菌，,通稱痢疾桿菌dysentery bacteria,無鞭毛，有菌毛,生化反應,形態(tài),,,A2志賀菌,低于其他腸道桿菌，對酸敏感,對理化因素的抵抗力,,血清學：根據(jù)生化反應特征和O抗原分為4群,,肝脾-腫大膽囊-腸道-排菌(2周）腎臟-尿-排菌（3周),A3傷寒、副傷寒的致病過程,傷寒沙門菌和甲型副傷寒桿菌、肖氏沙門菌

5、、希氏沙門菌,腸粘膜上皮細胞,腸系膜淋巴結,固有層淋巴結,進入血液,再次進入血液,,,,,,第一次菌血癥發(fā)熱,不適,全身疼痛,第二次菌血癥（1周）高熱、外周白細胞下降、肝脾腫大、表情冷漠、玫瑰疹、相對緩脈,,肝臟脾臟膽囊腎臟骨髓,并發(fā)癥腸穿孔腸出血,典型病例病程為3-4W,胸導管,,,微生物學檢查法,細菌學診斷標本：胃腸炎取糞便嘔吐物或可疑食物腸熱癥在病程不同階段采取不同標本； 發(fā)病1周取血；發(fā)病1-3

6、周取骨髓液 發(fā)病2 周取糞便；發(fā)病3周取尿,微生物學檢查,細菌學診斷,標本,SS平板,生化反應,血清學鑒定,,,,沙門菌生化反應,KIA:K/A-+,H2S陽性,賴氨酸脫羧酶陽性,IMVC:-+-+,MIU:+--,沙門菌血清學鑒定—肥達氏反應,一、原理 用已知的標準診斷菌液【傷寒桿菌：菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副傷寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5種】與受檢血清作試管凝集試驗，測定受檢血清中有無

7、相應抗體及其效價，以協(xié)助傷寒、副傷寒疾病的診斷。二、器材及試劑 標準診斷菌液（5種抗原：10ml/瓶）、生理鹽水（N.S）、待檢血清（兔血清）、試管、試管架、加樣槍或移液管（5mL、2mL、0.5mL每組3支）、一次性塑料滴管等。,1,三、實驗方法1. 冰箱中取出診斷菌液平衡至室溫。2. 將待檢血清作1：20、1：40、…..1：1280（每管0.5ml，每個稀釋倍數(shù)5管）稀釋，對照管 加N.S 0.5ml

8、,然后逐管加入混勻后診斷菌液1d， 充分振蕩混勻，標記（時間、班級、組號），35~37°C放置16-20h觀察結果。（配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20）3. 5/6個同學一組，第二天中午1:30觀察結果。,1:1280,傷寒O抗原,0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20,,,2.5ml,,2.5ml,,2.5mlN.S,,余2.5ml,,平分為5管，每管0

9、.5ml：得5管1:20稀釋倍數(shù)的血清,,平分為5管，每管0.5ml：得5管1:40稀釋倍數(shù)的血清,2.5mlN.S,,,,,,,余2.5ml,1:1280,,,,,,,,傷寒H抗原,副甲H抗原,副乙H抗原,副丙H抗原,,,,,,,,1:1280,傷寒O抗原,0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20,,,,四、凝集結果判斷（上清液、沉淀）“＋＋＋＋”：強，完全凝集，液體澄清，輕搖大片凝

10、 集塊。 “＋＋＋”：大部分凝集，液體輕度渾濁，凝集塊 小。 “＋＋”：中強，部分凝集，液體半澄清，凝集塊 顆粒狀。 “＋”：弱，少量凝集，液體渾濁。 “－”：不凝集，液體渾濁，和對照相同。,++++,,++ +++,,五、效價判斷 能出現(xiàn)明顯凝集（++）的

11、血清最高稀釋度。例：測定某病人“O”凝集效價結果如下：1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ + -,六、臨床意義 1.正常值：正常人血清中可能有低效價的抗體存在，其值高低存在地區(qū)差異，一般傷寒沙門菌“O”>1:80,“H”>1:160,副傷寒沙門菌“H”>1:80，有臨床意義；或

12、者進行疾病早期、中后期兩次血清效價比較，后者增高4倍/4倍以上有診斷價值。2. “O”抗體出現(xiàn)早、消失快、主要為IgM類；“H”抗體出現(xiàn)遲、可持續(xù)陽性數(shù)年，主要為IgG類，O、H凝集效價都超過正常值，意義較大。1）、“O”高“H”不高：感染早期，傷寒沙門菌“O”抗 原有交叉反應，建議一周后復查。2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、預防接種、非特異 性回憶反應。,3.傷寒、副傷寒甲、乙有部分共同

13、的O抗原，如O抗體效價增高，只能推斷為傷寒類疾病，不能區(qū)別傷寒或副傷寒。4.陰性反應：未感染，感染輕，應用有效抗菌藥物，接受皮質激素治療者，患者過于衰弱等。七、注意事項 1.應在光亮處先觀察管底凝集狀態(tài)，后輕搖判 定結果。 2.使用前搖勻菌液，菌液有搖不散的凝集塊時不能使用。,B弧菌科,弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶陽性，具有端極鞭毛，菌體短小、直或微彎的革蘭陰性桿菌。分為弧菌屬、氣單胞菌屬

14、、鄰單胞菌屬和發(fā)光桿菌屬等四個菌屬?；【鷮偬卣鳎耗蛪A不耐酸，營養(yǎng)要求不高。生長迅速, 在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水/堿性瓊脂平板上生長良好。在TCBS平板上為黃色菌落; 在含亞碲酸鉀的平板上形成中心灰褐色的菌落。多數(shù)菌株生長都需要鹽；大多數(shù)氧化酶都為陽性；具有一端單一鞭毛。,,TCBS平板上菌落,,含亞碲酸鉀的4號平板,弧菌科細菌及相關細菌的特征,,C非發(fā)酵菌,不發(fā)酵革蘭陰性桿菌包括假單胞菌屬、產堿桿菌屬、無色桿菌屬、不動

15、桿菌屬、莫拉菌屬、金氏桿菌屬、黃桿菌屬、艾肯菌屬、土壤桿菌屬、黃單胞菌屬、叢毛單胞菌屬等。假單胞菌屬為需氧、有鞭毛、無芽胞、無莢膜的革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗陽性。代表菌株為銅綠假單胞菌。,OF試驗：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+　　　　氮氣：+,假單胞菌鑒定程序,,銅綠假單胞菌,1、形態(tài)觀察：G- 桿菌，多形性，有鞭毛、菌毛、莢膜，無芽孢,產熒光素和綠膿素,2、培養(yǎng)特性：專性需氧，4℃不生長42 ℃生長，在血平板上