革蘭陽性需氧桿菌

1、1,第十三章 革蘭陽性需氧桿菌,2,需氧芽胞桿菌屬（Bacillus）48個(gè)種 與醫(yī)學(xué)有關(guān)5個(gè)種 炭疽芽胞桿菌（B.anthracis） 蠟樣芽胞桿菌（B.cereus） 蕈狀芽胞桿菌（B.mycoides） 巨大芽胞桿菌（B.megaterium） 蘇云金芽胞桿菌（B.thuringiensis）,3,第一節(jié) 炭疽芽胞桿菌（Bacillus anthracis，B.anthraci ),一、臨床意義 炭疽

2、是人畜共患的急性傳染病 主要是牛、羊等食草類動(dòng)物的傳染病，人可通過接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染 皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等， 并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎,4,致病物質(zhì),莢膜：抗吞噬，有利于細(xì)菌在組織內(nèi)繁殖擴(kuò)散炭疽毒素：保護(hù)性抗原、致死因子、水腫因子,5,所致疾病,炭疽?。簜魅驹矗夯疾∈巢輨?dòng)物及其制品或被污染物傳播途徑：接觸——皮膚炭疽 食用——腸炭疽

3、 吸入——肺炭疽可并發(fā)敗血癥，死亡率極高,6,乙類傳染病發(fā)生肺炭疽按甲類處理,病后可獲得持久免疫力,7,形態(tài)染色:致病菌中最大的G+桿菌，兩端平切、竹節(jié)狀有毒株可有明顯莢膜,二、 微生物特性,炭疽芽胞桿菌 亞甲基藍(lán)染色 ×1000,革蘭染色 ×1000,8,芽胞——橢圓形，小于菌體，位于菌體中央多在有氧條件下形成，25～30℃，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動(dòng)物尸體解剖后暴露在空

4、氣中，都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞，尸 體嚴(yán)禁解剖,9,培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，生長條件不嚴(yán)格，最適溫 度30～35℃普通培養(yǎng)基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、 無光澤，邊緣不整齊的菌落，低倍鏡下菌落邊 緣呈卷發(fā)狀,10,BAP：12～15h不溶血，18～24h輕微溶血其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速,炭疽桿菌在血瓊脂平板中菌落,11,肉湯—絮狀沉淀生長明膠—37℃18～24h表面液化成漏斗狀

5、，由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散形成倒松樹狀。NaHCO3BAP： --有毒株—5%CO2、37℃24～48h、產(chǎn)生莢膜 呈黏液型菌落，挑取時(shí)呈粘絲狀(鑒別要點(diǎn)) --無毒株—粗糙型菌落,12,生化反應(yīng)：,分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解淀粉、還原硝酸鹽不產(chǎn)生吲哚和硫化氫、不利用檸檬酸鹽、不 分解尿素在牛乳中生長2～4天牛乳凝固→緩慢胨化觸酶（+）、卵磷脂酶

6、弱（+）,13,抗原構(gòu)造：菌體多糖抗原： --與毒力無關(guān)，耐熱、耐腐敗，長時(shí)間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli熱沉淀反應(yīng)）。 --特異性不高，能與其他需氧芽胞桿菌、14型肺炎鏈球菌、人A血型抗原發(fā)生交叉反應(yīng)。,14,莢膜多肽抗原： --與毒力有關(guān)，有抗吞噬作用，有利于細(xì) 菌生長和擴(kuò)散 --莢膜腫脹試驗(yàn)，對(duì)本菌鑒定有意義芽胞抗原： 有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值,15,炭疽毒素：--保護(hù)性

7、抗原（PA)、致死因子（LF）、水腫 因子（EF）三個(gè)組分--單獨(dú)皆無致病性，與PA結(jié)合才顯示出致病性--具有抗吞噬和免疫原性,16,抵抗力：,--芽胞抵抗力很強(qiáng)，煮沸10min或干熱140℃ 3h才能殺滅--在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致 病力不減，牧場(chǎng)一旦污染，傳染性可持續(xù)數(shù) 十年--生物武器,17,--芽胞對(duì)化學(xué)消毒劑抵抗力不一，對(duì)碘和氧化 劑較敏感，常用以下方法殺菌：

8、 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高錳酸鉀 15min、 0.5%過氧乙酸 10min --對(duì)磺胺、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、 氯酶素均敏感,18,要求快速檢出、分離鑒定病原菌，以利早期確診、查清疫源、及時(shí)治療和采取預(yù)防對(duì)策,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),19,標(biāo)

9、本的采集與處理,皮膚炭疽：病灶深部標(biāo)本肺炭疽：痰和血液腸炭疽：糞、嘔吐物腦膜炭疽：CSF、血液死于敗血癥的動(dòng)物，嚴(yán)禁宰殺和解剖，可消 毒皮膚后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié)。,20,無雜菌污染標(biāo)本：直接接種肉湯增菌或固體培養(yǎng)基污染雜菌固體標(biāo)本：加10倍量生理鹽水充分浸泡，振 蕩10～15min 、靜置10min，取懸液65℃水浴30min或 85℃5min殺死雜菌，保留芽胞

10、活性，再增菌和培養(yǎng)污染雜菌液體標(biāo)本：離心 ，棄上清液后，加0.5%洗滌 劑振蕩10～15min ，離心取沉淀物增菌和分離培養(yǎng),21,生化反應(yīng),噬菌體裂解,青霉素抑制,毒力試驗(yàn),莢膜腫脹試驗(yàn),22,23,涂片染色：--G染色、莢膜染色、芽胞染色—初步報(bào)告--莢膜熒光抗體染色核酸檢測(cè)：核酸雜交分離培養(yǎng)：--BAP、戊烷脒多粘菌素B平板--2%兔血清肉湯增菌→分離培養(yǎng),24,鑒定試驗(yàn)：形態(tài)和菌落特征生化試驗(yàn):表11-1

11、串珠試驗(yàn):--接種于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉湯 中，37℃ 6h，大而均勻成串的圓球狀菌體--與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān)--類炭疽無此現(xiàn)象,25,青霉素抑制試驗(yàn)：接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，37℃24h 生長 受抑制不生長 串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗(yàn)：,,,,兔血瓊脂平板,抑菌環(huán),青霉素紙片,26,噬菌體裂解

12、試驗(yàn)：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗(yàn)： 接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的平板， 10%CO2、37℃、24～48h 有毒株形成莢膜—黏液型菌落 無毒株不形成莢膜—粗糙型菌落 動(dòng)物試驗(yàn)： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接種,27,植物凝集素試驗(yàn)：Ascoli熱沉淀試驗(yàn)：可作追溯性診斷,28,第二節(jié) 蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus, B. cereus ),29,一、臨床意義,食

13、物中毒含菌量達(dá)105/g以上嘔吐型——耐熱腸毒素腹瀉型——不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎,30,夏、秋季多見食物有米飯、乳品、禽畜肉類、果汁飲料等，大多為加熱烹調(diào)過的熟食在米飯中極易繁殖，由米飯受污染引起的食物中毒在國內(nèi)、外均為常見中毒食物大多無腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應(yīng)引起注意,31,形態(tài)與染色：- G+大桿菌-生長6h后即形成圓形芽胞、位于 菌體中心或次末端、不突出菌體-菌體兩端

14、平截，多數(shù)呈鏈狀排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、無莢膜,二、微生物特性,32,培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高最適溫度30~35℃普通瓊脂平板：菌落較大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有 蠟樣光澤,33,BAP —有β溶血 卵黃平板—生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng),34,生化反應(yīng)：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素、糊

15、精，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳，液化明膠，VP（+）、卵磷脂 酶（+） 多次傳代后生化特性?？筛淖?35,抵抗力：耐熱，肉湯中細(xì)菌需100℃20min才能殺死，食物中毒菌株的游離芽胞耐受100℃30min、干熱120℃60min才能殺死對(duì)氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感，對(duì)青霉素、磺胺、呋喃類耐藥,36,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),標(biāo)本采集： 可疑食物、糞便、嘔吐物，因食品暴露于空氣中，在一定程度都會(huì)受到本菌污染，所以不能分離出該

16、菌就認(rèn)為是引起食物中毒的病原菌。,37,確診由該菌引起的食物中毒必須：,從食物中分離出菌數(shù)≥105CFU/g，提示本菌活躍生長，構(gòu)成潛在危險(xiǎn)從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或)嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型,38,39,檢驗(yàn)方法：直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計(jì)數(shù) 普通瓊脂平板、BAP、卵黃平板鑒定與分型： 根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)染色、生化反應(yīng)等初步鑒定 生化分型、血清分型、噬菌體分型，腸毒素檢測(cè),40,第三節(jié)產(chǎn)單核細(xì)胞李斯

17、特菌和紅斑丹毒絲菌,41,一、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（Listeria monocytogenes )隸屬于李斯特菌屬,42,（一） 臨床意義,李斯特菌屬有7個(gè)種，只有該菌對(duì)人和動(dòng)物致病分布廣泛，土壤、水、植物、人和動(dòng)物糞便中均存 在，亦可自甲殼動(dòng)物、蠅、蜱中分離出能引起多種野生動(dòng)物和家畜感染（羊、馬、狗、貓、 鳥、魚等）正常人糞便帶菌率達(dá)10%左右，70%的人可短期帶 菌。新生兒、免疫功能降低者，易受該菌感染,43

18、,致病物質(zhì)：李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子內(nèi)在素——表面蛋白（侵襲性蛋白）磷脂酶C,44,所致疾病:,健康帶菌者是主要的傳染源 污染食物，糞-口途徑傳播，通過腸道擴(kuò)散全身胎盤和產(chǎn)道——感染新生兒接觸病畜及產(chǎn)品——眼和皮膚的局部感染,45,孕婦李斯特菌病新生兒李斯特菌病成人李斯特菌病局部感染,46,（二） 微生物特性,形態(tài)與染色： G+短小桿菌，形態(tài)與培養(yǎng)時(shí)間有關(guān)-37℃ 3～6h，菌體主要呈桿

19、狀，隨后以球桿狀為 主，3～5天常形成長絲狀 無芽胞，一般不形成莢膜，在含血清的葡萄 糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜,47,,20～25℃形成周鞭毛，有動(dòng)力；37℃時(shí)鞭毛 很少或無 細(xì)菌接種半固體培養(yǎng)基，置室溫，由于動(dòng)力 強(qiáng)，細(xì)菌自穿刺線向四周彌漫生長，在離瓊 脂表面數(shù)毫米處出現(xiàn)一個(gè)倒傘形的生長，是 本菌特征之一,48,培養(yǎng)特性：,兼性厭氧菌、生長溫度范圍廣0.5～45℃均生長 （4℃冷增菌），最

20、適30～37℃營養(yǎng)要求不高，在含血液、血清、腹水的培養(yǎng)基生 長更好BAP—極小的露滴狀、側(cè)光微顯藍(lán)綠色→灰白色 菌落。狹窄的β溶血環(huán)萘啶酸選擇性平板—細(xì)密濕潤、邊緣整齊的蘭色圓 形小菌落肉湯——均勻混濁，表面有菌膜,49,生化反應(yīng)：,37℃24h，發(fā)酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麥芽糖和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 觸酶（+）甲基紅（+）VP（+）水解七葉苷、水解精氨酸產(chǎn)氨CAMP（+）,50,分型：,根據(jù)O抗原和H抗原，分

21、4個(gè)血清型， 1、3、4型可分若干亞型抗原結(jié)構(gòu)與毒力無關(guān)，與地理分布有聯(lián)系與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸 桿菌等有共同抗原,51,抵抗力：,耐鹽、耐堿、不耐酸對(duì)熱、常用消毒劑敏感多種抗生素敏感，首選氨芐青霉素，青霉素、鏈霉素、紅霉素等也敏感對(duì)桿菌肽、多粘菌素耐藥,52,（三） 微生物學(xué)檢驗(yàn),標(biāo)本采集： 血液、CSF、宮頸、陰道、鼻煙分泌物等直接涂片： --在CSF標(biāo)本中成對(duì)排列，形如球菌，易誤認(rèn)

22、為肺 炎鏈球菌 --G染色過度脫色形似流感桿菌 -- 有時(shí)與類白喉?xiàng)U菌也極易混淆 可用該菌1型和4型及多價(jià)熒光抗體染色，同時(shí)作動(dòng)力檢查,53,分離培養(yǎng)：BAP、巧克力平板雜菌污染標(biāo)本可用20%NaCl心腦浸液肉湯2支 1支—10%CO2，37℃24～48h→分離培養(yǎng)（BAP、萘啶酸選擇性平板） 1支—4℃ “冷增菌” →分離培養(yǎng)（每24h一 次，共4次，以后每周一次，至少4周）,54,鑒定：

23、形態(tài)特征、菌落特點(diǎn)、動(dòng)力及生化反應(yīng)作出 鑒定 可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多價(jià)抗 血清做玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定與其他G+菌鑒別,55,觸酶 動(dòng)力 馬尿酸鹽水解產(chǎn)單核李斯 + + -B群鏈球菌 - - +,,,本菌有耐堿耐鹽的特點(diǎn)，可用觸酶試驗(yàn)與 腸球菌鑒別,56,二、 紅斑丹毒

24、絲菌（Erysipelothrix rhusiopathiae， E. rhusiopathiae）,本菌隸屬于丹毒絲菌屬,57,（一） 臨床意義,廣泛分布于自然界，是許多脊髓動(dòng)物和無脊 髓動(dòng)物的共生菌或致病菌易感動(dòng)物有小鼠、豬、魚、火雞等主要儲(chǔ)存宿主是豬人類可因接觸病畜或其產(chǎn)品而感染,58,毒力與其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶有關(guān)，能使 細(xì)菌粘附至靶細(xì)胞從事屠宰、經(jīng)營魚類和皮革行業(yè)的人員及獸醫(yī)等感染機(jī)會(huì)較多通過破損皮膚侵入，引

25、起局限性皮膚病灶，通常稱“魚毒”或“類丹毒”,59,（二）微生物特性,形態(tài)與染色： G+桿菌，菌體細(xì)長、直或稍彎，單個(gè)或短鏈狀，慢性期分離的菌落為粗糙型，常呈長絲狀，而且有分支及斷裂，與放線菌近似.無莢膜、無芽胞、無鞭毛,紅斑丹毒絲菌 革蘭染色 1000×,60,培養(yǎng)特性:厭氧或微需氧、初次分離需在厭氧環(huán)境，傳代后有氧環(huán)境也能生長，最適溫度30-35℃。在含葡萄糖或血清培養(yǎng)基生長旺盛,61,BAP：35℃24h可形成兩

26、種菌落光滑型：菌落細(xì)小、透明突起、發(fā)亮、邊緣整 齊、質(zhì)軟易于懸于液體中，毒力較強(qiáng)粗糙型：菌落較大，顆粒狀、扁平、邊緣不齊 可呈卷發(fā)狀，無毒力BAP上新分離的菌株有輕微的α溶血，培養(yǎng)時(shí)間延長溶血現(xiàn)象明顯，傳代后溶血特性常消失,62,在半固體表層下數(shù)mm處發(fā)育最好，常呈帶狀 含碲鹽的培養(yǎng)基——黑色菌落,63,,葡萄糖肉湯：培養(yǎng)24h后，呈輕微混 濁，不 形成菌

27、膜，室溫靜置2~3天后，管底有少量 灰色沉淀；粗糙型沉淀較多。 S-R變異同時(shí)毒力、抗原性也發(fā)生變異，但 遺傳學(xué)上不穩(wěn)定，常出現(xiàn)互變。,64,（三）微生物學(xué)檢驗(yàn),標(biāo)本：病灶邊緣組織碎片或皮膚病變抽出液直接涂片G染色鏡檢：G+細(xì)長桿菌，有時(shí)長絲形，單獨(dú)或呈短鏈狀。分離培養(yǎng)：1%葡萄糖肉湯，35℃5%CO2環(huán)境增菌，每日移種BAP，可出現(xiàn)二種菌落（S型和R型）,65,鑒定依據(jù)： G+、H2S +、無動(dòng)力、觸酶 -、吲哚 -

28、、VP -與產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌鑒別（表11-2）新霉素敏感試驗(yàn)：紅斑丹毒絲菌—R 產(chǎn)單核李斯特菌—S 動(dòng)物毒力試驗(yàn)：對(duì)小鼠、大鼠、兔、鴿均有致病性，0.2ml的2~4天培養(yǎng)物注入小鼠腹腔，4-5天后，敗血癥而死，心血培養(yǎng)（+）,66,第四節(jié) 陰道加特納菌,（Gardnerella vaginalis ，GV）,屬于加特納菌屬此菌屬只有本菌一個(gè)種,6

29、7,一、 臨床意義,與非特異性陰道炎（細(xì)菌性陰道?。┯嘘P(guān),68,二、 微生物特性,形態(tài)與染色： --G染色視菌株和菌齡不同而異，實(shí)驗(yàn)室保存 菌株趨向G-，新鮮臨床標(biāo)本中分離的菌株 趨向G+，生長在高濃度的血清中呈G+ --具有多形性，兩端鈍圓，無芽胞、無莢 膜、無鞭毛,69,培養(yǎng)特性：,兼性厭氧，

30、營養(yǎng)要求較高，在含5%人血瓊脂平板上3%～5%CO2、35～37℃環(huán)境中培養(yǎng)48h后，可形成0.3～0.5mm大小、圓形、光滑不透明的菌落，在兔血平板上可出現(xiàn)β溶血，在羊血平板上不溶血。,70,生化反應(yīng)：氧化酶 -、觸酶 -、尿素酶 -發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解馬尿酸鈉和淀粉，吲哚 -、明膠液化 -、甘露醇分解 -抵抗力：對(duì)氨芐青霉素、羥氨芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素、甲硝噠唑敏感，對(duì)萘啶酸、

31、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐藥。,71,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),標(biāo)本采集： 陰道和宮頸分泌物等直接濕片鏡檢： 大量陰道上皮細(xì)胞，少量膿細(xì)胞及無數(shù)成簇的細(xì)小桿菌群集并吸附于上皮細(xì)胞表面，使細(xì)胞特別是邊緣不清，呈鋸齒形，即為線索細(xì)胞,72,涂片染色鏡檢：觀察線索細(xì)胞，了解陰道菌群狀況，常見大量小的G-和染色不定的桿菌和球桿菌，而無大的G+桿菌（乳酸桿菌）pH測(cè)定：pH＞4.5，提示細(xì)菌性陰道病胺試驗(yàn)：滴加10%KOH即發(fā)出魚腥