鴨TLR2基因多態(tài)性及其與免疫性能的相關(guān)研究.pdf

1、本研究以鴨TLR2基因?yàn)楹蜻x基因，利用生物信息學(xué)方法，克隆了鴨TLR2（Tolllike receptor2）基因的編碼全序列，在群體范圍內(nèi)進(jìn)行了PCR-SSCP分析，并對(duì)鴨TLR2單核苷酸多態(tài)性及其與部分免疫性能指標(biāo)之間進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，篩選與鴨的早期免疫性狀相關(guān)的分析標(biāo)記，為鴨的分子標(biāo)記輔助育種提供理論基礎(chǔ)。
　　 一、鴨TLR2基因的克隆及其生物信息學(xué)分析
　　 本實(shí)驗(yàn)克隆得到的鴨TLR2基因編碼全序列，全長(zhǎng)2383b

2、p，由一個(gè)開(kāi)放閱讀框組成，編碼793個(gè)氨基酸，分子量為90416.6Da，等電點(diǎn)為7.08。鴨TLR2基因與人、牛、豬、老鼠和雞TLR2基因序列的比對(duì)結(jié)果顯示，鴨TLR2基因與雞TLR2基因序列同源性最高為80.0％，人（63.5％）次之，順次為豬（61.4％），鼠（60.0％）和牛（58.4％）。蛋白的2、3級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，該序列內(nèi)存在5次跨膜分子組成TLR超家族的基序。鴨推定TLR2蛋白的三維結(jié)構(gòu)以人TLR2蛋白為模型，相似度為77

3、.397％。
　　 二、鴨TLR2 PCR-SSCP檢測(cè)及其多態(tài)與免疫性能的關(guān)聯(lián)分析
　　 試驗(yàn)采用PCR-SSCP的方法對(duì)所克隆的鴨TLR2基因部分編碼序列進(jìn)行了SNPs檢測(cè)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)的4對(duì)引物中，在M2和M4兩對(duì)引物擴(kuò)展序列中檢測(cè)到了多態(tài)性，均表現(xiàn)為2種基因型。鴨群體中SNPM2以等位基因A為主，等位基因頻率達(dá)到0.8335，等位基因B頻率僅為0.1665。SNPM4以等位基因C為主，等位基因頻率達(dá)到0.8415，等

4、位基因D頻率僅為0.1585。x2適合性檢驗(yàn)結(jié)果表明，鴨群體在SNPM2和SNPM4均處于平衡狀態(tài)（p>0.05）。SNPM2和SNPM4的多態(tài)信息含量分別為0.239和0.231，屬低度多態(tài)。
　　 最小二乘分析和顯著性檢驗(yàn)表明：SNPsM2和SNPsM4兩個(gè)變異位點(diǎn)各形成的兩種基因型個(gè)體的免疫器官指數(shù)之間差異都不顯著（P>0.05）。對(duì)縉云麻鴨TLR2基因編碼全序列部分片段不同基因型與免疫細(xì)胞因子進(jìn)行最小二乘均值多重比較，結(jié)