鴨A-FABP基因cDNA克隆與基因多態(tài)性的研究.pdf

1、沉積在肌肉內的脂肪是影響肉質和風味的一項重要經濟性狀。肌內脂肪（Intramuscular fat，IMF）被認為與肉質及口感呈正相關，影響肉質的多汁性、嫩度及風味。脂肪酸結合蛋白(Fatty acid binding protein，F(xiàn)ABP)基因在動物體內脂肪代謝過程中的作用，與肌內脂肪含量等肉質性狀顯著相關，其中A-FABP(Adipocyte fatty acid bingding protein，A-FABP)和H-FABP(

2、Muscle and heart fatty acid binding protein，H-FABP)已被證實是這些數量性狀的候選基因，進行了重點研究。目前家禽育種工作已經取得了很大進展，然而高強度選擇又帶來了許多負面影響。其中控制脂肪在鴨體內的過多蓄積，提高鴨胴體質量和適口性是中國養(yǎng)禽業(yè)急需解決的問題。本研究把A-FABP基因作為鴨肌內脂肪含量的候選基因加以研究，旨在通過cDNA末端快速擴增技術（Rapid amplification

3、 of cDNA ends，RACE）克隆并分析鴨A-FABP基因的結構與功能，利用聚合酶鏈式反應－單鏈構象多態(tài)性( Polymerase chain reaction-Single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP)技術分析鴨A-FABP基因的單核苷酸多態(tài)性，以闡明鴨A-FABP基因的遺傳變異，繼而以此為分子遺傳標記進行輔助選擇應用于鴨的育種，對降低鴨體脂、提高鴨肌內脂肪含量和改善鴨肉

4、品質具有重要意義。
　　 為揭示鴨A-FABP基因的結構和功能，應用RACE技術首次克隆并鑒定了鴨A-FABP基因cDNA序列。首先用一對含高度保守的DNA片段的兼并引物，從鴨腹部脂肪組織總RNA擴增部分A-FABP片段，經驗證與已知序列一致；接著測序并設計新引物分別從5′和3′RACE擴增延長該片段。最后根據全基因的序列設計上、下游引物，經SEQMAN軟件拼接5′RACE產物和3′RACE產物以及已知序列獲得片段大小為652b

5、p的cDNA序列。與雞A-FABP基因進行BLAST比對分析，結果表明該652bp的cDNA序列由5′-UTR區(qū)、CDS區(qū)和3′-UTR區(qū)組成，其中CDS區(qū)長度為399bp，5′非編碼區(qū)長度為64bp，3′非編碼區(qū)長度為189bp。包含完整的1、2、3、4外顯子序列，與雞A-FABP基因序列4個外顯子一樣也分別編碼24，58，34和16個氨基酸。鴨A-FABP基因399bp的開放閱讀框編碼132個氨基酸，推導和分析氨基酸序列表明，分子結

6、構與雞A-FABP相似，其中有些氨基酸殘基表現(xiàn)出較高的保守性。利用DNAMAN軟件比較核苷酸序列，與豬、雞和鵝的A-FABP基因分別有78％、95％和98％的同源性。
　　 根據RACE獲得鴨A-FABP基因的cDNA序列，設計引物P0，擴增出該基因的第二內含子序列，在此基礎上又設計3對引物利用PCR-SSCP方法對獲得的序列進行多態(tài)性研究。結果引物P1在北京鴨、縉云麻鴨等品種中發(fā)現(xiàn)4處單堿基突變，分別為：386處“A-T”突變