NAA-6-BA對(duì)鐵皮石斛試管苗生長(zhǎng)發(fā)育和生物堿積累的研究.pdf

1、鐵皮石斛是我國(guó)名貴的中草藥，富含石斛多糖和生物堿等多種生物活性成分。由于鐵皮石斛對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的要求苛刻，鐵皮石斛的自然資源幾乎瀕臨滅絕。目前，主要是通過組織培養(yǎng)技術(shù)提供試管苗，但組織培養(yǎng)中人們只是通過以往經(jīng)驗(yàn)來添加外源激素，外源激素對(duì)內(nèi)源激素的調(diào)控及內(nèi)源激素含量的變化尚不明確。
　　 為此，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定鐵皮石斛內(nèi)源激素含量，對(duì)其色譜條件進(jìn)行摸索，并添加外源激素來研究外源激素對(duì)其鐵皮石斛試管苗生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程、內(nèi)源激素和

2、生物堿積累的影響，以期為人們?cè)阼F皮石斛試管苗培養(yǎng)中更加合理有效的添加外源激素提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：1．HPLC測(cè)定鐵皮石斛內(nèi)源激素時(shí)，用80％甲醇浸提，反復(fù)離心后，經(jīng)Sep-Pak C18預(yù)柱0.45μm微孔濾膜純化，樣品不需經(jīng)過氮?dú)獯蹈?，可直接檢測(cè)。ZT和IAA測(cè)定的色譜條件為：兩者均采用ODS-C18反相色譜柱(250mm×4.6mm):柱溫40°C；流速1.0ml/min；進(jìn)樣量為10μl，外標(biāo)法峰面積定量。檢測(cè)ZT時(shí)流

3、動(dòng)相比例為乙腈：水=30:70(V/V):檢測(cè)波長(zhǎng)270nm；檢測(cè)IAA的流動(dòng)相比例為甲醇：0.1％乙酸＝54：46(v/V)；檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。ZT和IAA相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.93％和1.07％，回收率分別為91.66％和82.09％。
　　 2．鐵皮石斛種子5-7周后萌發(fā)形成原球莖，9-10周后形成根狀莖，進(jìn)一步發(fā)育成芽和根，最后形成幼苗，整個(gè)過程14-15周。種子形成根狀莖時(shí)ZT/IAA為17.67，鐵皮石斛內(nèi)源ZT和

4、IAA的含量能夠滿足種子萌發(fā)的需要。在鐵皮石斛芽形成前，不添加外源激素有利于種子萌發(fā)和形成芽。
　　 3．NAA/6-BA為1:10，鐵皮石斛試管苗繁殖系數(shù)為7.5，相對(duì)于對(duì)照提高了178.4％。鐵皮石斛試管苗株高增加緩慢，試管苗分化形成大量叢生芽。添加NAA/6-BA為1:10后，培養(yǎng)初期鐵皮石斛試管苗內(nèi)ZT含量增加IAA下降，而后期ZT含量下降IAA含量上升。60天時(shí)試管苗內(nèi)源ZT/IAA為8.49，比對(duì)照提高了103.1％

5、。鐵皮石斛發(fā)育前期可添加NAA/6-BA為1：10以促進(jìn)試管苗發(fā)芽。
　　 4．NAA/6-BA為10:1時(shí)，鐵皮石斛試管苗鮮重和株高增加較快，并且形成大量的根。添加NAA/6-BA為10:1后，培養(yǎng)初期IAA含量上升而ZT含量下降。60天時(shí)試管苗內(nèi)源ZT/IAA為2.94，比對(duì)照降低了29.7％。鐵皮石斛發(fā)育后期添加NAA/6-BA為10:1可以促進(jìn)試管苗生根。
　　 5．NAA/6-BA為1:10時(shí)，鐵皮石斛試管苗中