番茄LeCBLs的功能研究.pdf

1、鈣離子作為第二信使在植物應(yīng)答生物與非生物脅迫中起著重要作用。細(xì)胞中的Ca+變化在持續(xù)時間、空間分布與變化幅度不同，即產(chǎn)生了不同的“鈣信號”，每種鈣信號代表一種特定的脅迫刺激。CBL是普遍存在于植物中一類重要的鈣離子感受器家族，通過結(jié)合CIPK的NAF結(jié)構(gòu)域，激活CIPK激酶，形成CBL-CIPK信號網(wǎng)，應(yīng)答各種脅迫反應(yīng)。
　　 目前，在模式植物擬南芥(Arabidopsis)與水稻（Oryza sativa）中的相關(guān)研究已獲得了

2、較深入的進(jìn)展，在玉米、豌豆、高粱等植物中相繼開展了相關(guān)研究。序列高度相似的CBLs在不同的物種間其功能可能相同，也可能存在差異，有必要剖析不同物種的CBLs功能。番茄（Lycopersicon esculentum）是研究基因功能重要的模式植物之一，CBLs在番茄中的功能與機(jī)制尚不清楚。因此開展番茄LeCBLs的研究，有助于揭示LeCBLs的功能，更好地理解番茄抗逆機(jī)制，為改良番茄抗逆品種提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　 1.

3、構(gòu)建5個番茄LeCBLs(LeCBL2、LeCBL3、LeCBL4、LeCBL9與LeCBL10)超表達(dá)載體及4個(LeCBL2、LeCBL3、LeCBL9和LeCBL10) RNAi載體;通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化本氏煙（Nicotiana benthamiana）和番茄(Money Makecf-0)，獲得一定數(shù)量的潮霉素抗性的本氏煙和番茄植株，收獲了部分T1代抗性本氏煙種子及T0代抗性番茄種子;
　　 2.對實驗室已構(gòu)建的番

4、茄LeCBL8超表達(dá)及RNAi載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化本氏煙與番茄，獲得潮霉素抗性的本氏煙和番茄植株，收獲了部分T1代抗性本氏煙種子及T0代抗性番茄種子。對實驗室已有的LeCBL8抗性植株（野生型為W38，由本實驗室前期已轉(zhuǎn)化并初步發(fā)現(xiàn)LeCBL8可能與抗鹽有關(guān)）開展了在冷害、高鹽、高pH、低pH及干旱脅迫下的功能分析，確證超表達(dá)LeCBL8提高了對高鹽的耐受性，同時也可能參與了冷害、高鹽及干旱等逆境脅迫;
　　 3.Bi

5、FC(Bimolecular fluorescence complementation)技術(shù)是用于研究蛋白互作的一種有效方法，根據(jù)實驗室已獲贈的BiFC載體存在的不足之處，以pCAMBIA1301為骨架進(jìn)行了改造，獲得p1301-cEYFP-c與p1301-nEYFP-c載體。利用該載體研究了LeCBLs(LeCBL3、 LeCBL4、 LeCBL9和LeCBL10)與LeCIPKs（LeCIPK3、 LeCIPK8、 LeCIPK23

6、和LeCIPK24）的互作情況。發(fā)現(xiàn)LeCBL3-LeCIPK8、 LeCBL9-LeCIPK8、 LeCBL9-LeCIPK23、 LeCBL9-LeCIPK24和LeCBL10-LeCIPK24互作較強(qiáng);LeCBL3-LeCIPK23、 LeCBL3-LeCIPK24、LeCBL4-LeCIPK3、 LeCBL4-LeCIPK8、 LeCBL4-LeCIPK23、 LeCBL4-LeCIPK24、LeCBL9-LeCIPK3、 Le