番茄SlDP1基因的克隆及功能研究.pdf

1、細胞周期是一個精密的過程，受到多種物質的調控，E2F/DP是其一個重要的功能復合體。DP是E2F的伴侶蛋白，使E2F異源二聚化，并協(xié)助其定位到細胞核，使基因轉錄或抑制。
　　植物E2F/DP家族基因轉錄的總體水平較低，但是該家族基因在某些特異的組織中表達豐沛，如增生器官和生長旺盛的組織等?；蛐酒治霭l(fā)現(xiàn)該家族可能還參與植物生命過程的營養(yǎng)調控。
　　本研究根據SNG數據庫獲得DNA序列信息克隆了番茄SlDP1基因，開放閱讀框

2、為906 bp，可編碼301個氨基酸。采用生物信息學的方法分析該基因及編碼蛋白的分子特征；通過熒光定量PCR研究該基因的表達模式；研究SlDP1基因對激素、鹽脅迫及傷害的應答特征；構建了沉默載體并對番茄進行遺傳轉化，檢測該基因在番茄葉片的沉默效果。本研究得到的主要結論如下：
　?、俑鶕NG數據庫登錄信息（SGN-U567182），設計引物克隆該基因的開放閱讀框和部分C-末端序列，大小為1094 bp，命名為SlDP1；
　

3、?、谏镄畔W分析，SlDP1基因定位于細胞核，具有保守的DNA結合域、二聚化區(qū)域和C-末端及多個磷酸化位點。二級結構預測SlDP1蛋白含51.50％的環(huán)狀結構，34.55%的α螺旋和2.66%的β折疊。通過編碼蛋白序列比對，顯示該基因與葡萄等同源性高達70%~80%，同源區(qū)域主要集中在 DNA結合域、二聚化區(qū)域和C-末端部分區(qū)域；
　?、郾磉_模式分析發(fā)現(xiàn) SlDP1基因在野生型番茄根、花及萼片以及果實成熟時期B、B+4及B+7時

4、期表達量較高，并且在果實的發(fā)育成熟過程中其表達量有一個明顯的上升趨勢；
　?、芡庠醇に靥幚矸阎仓臧l(fā)現(xiàn)，ACC和IAA處理的植株SlDP1基因表達量提高；
　　⑤鹽處理的葉片 SlDP1基因表達量下降，傷害處理的葉片該基因表達量顯著下降；
　?、蕹晒嫿?pBIN19：SlDP1沉默載體，用接合轉移的方法轉化農桿菌LBA4404，通過番茄外植體侵染，Kan篩選獲得轉基因番茄苗。NPTII檢測，將轉基因苗命名為1-5五