番茄Sly-miR393的克隆、鑒定及其功能研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類內源性的、長度為21～24個堿基的小分子非編碼RNA，它通過對靶基因mRNA的降解或者抑制其翻譯等方式，在轉錄后水平上特異調控靶基因的表達。miR393是植物中高度保守的miRNA，通過特異地調節(jié)生長素受體家族成員(TIR，AFB1，AFB2和AFB3)，在生長素信號轉導過程中發(fā)揮著重要的調控作用。
　　 本文以番茄為研究材料，分離和鑒定了Sly-miR393及其靶基因，分析了它們在番茄中的時

2、空特異表達模式。研究了番茄中Sly-miR393對靶基因的調控方式、對生長素反應等，為闡明Sly-miR393在番茄的生長素信號途徑中的調控作用具有重要意義。本研究主要取得以下研究結果：
　　 1、通過生物信息學方法，在番茄基因組數(shù)據(jù)庫中篩選到能夠形成完整莖環(huán)結構的Sly-miR393前體序列。以基因組DNA為模板，克隆了番茄Sly-miR393前體，并構建了以CaMV35S為啟動子的超表達載體，即pLP35S-pre-Slym

3、iR393。
　　 2、采用農桿菌介導的番茄遺傳轉化法，獲得了轉基因番茄植株，并且通過RT-PCR技術驗證了sLY-miR393在番茄中超表達。
　　 3、Sly-miR393的表達模式表明，莖中的表達豐度最強，花中較強，根、葉、花蕾中表達溫和。果實中表達豐度較低，并且隨著果實后期成熟，表達水平逐漸下降。
　　 4、根據(jù)miR393與其靶標mRNA之間的序列互補性，在番茄基因組數(shù)據(jù)庫中尋找到三個生長素受體同源基因

4、SlTIR，SlTIR1-like1和SlAFB，并且通過5’RACERT-PCR技術證實，在番茄體內Sly-miR393對靶基因SlTIR，SlTIR1-like1和SlAFB的轉錄本進行剪切降解。
　　 5、利用定量PCR技術分析了靶基因在不同組織的特異性表達情況，發(fā)現(xiàn)Sly-miR393的表達模式與SlTIR1在葉和莖中，SlTIR1-like1在花蕾，SlAFB在花、黃果、葉組織中出現(xiàn)互補的關系。
　　 6、對超