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文檔簡介
1、MicroRNA(miRNA)是由約22個(gè)核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,廣泛存在于真核細(xì)胞中。多項(xiàng)研究表明,miRNA在植物-病原物互作過程中起著至關(guān)重要的調(diào)控作用。番茄是常見的經(jīng)濟(jì)作物,世界各地均有大面積種植,由致病疫霉引起番茄晚疫病常給番茄生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。隨著miRNA研究技術(shù)的不斷完善,高通量測序技術(shù)因其獨(dú)特的優(yōu)勢逐漸被廣泛應(yīng)用于miRNA的挖掘中。miR396是植物中特有的一類保守miRNA,雖有文獻(xiàn)證明其在番茄中存在
2、,但目前仍沒有關(guān)于它在番茄中功能特性的研究報(bào)道。因此,基于上述研究需要,本研究利用高通量測序方法構(gòu)建了2個(gè)番茄小RNA文庫,并分析了miR396在番茄抗病抗逆中的作用。
首先,本研究通過高通量測序方法構(gòu)建了致病疫霉誘導(dǎo)下的2個(gè)番茄小RNA文庫,獲得了230個(gè)已知和67個(gè)新的miRNA;差異表達(dá)分析顯示118個(gè)miRNA在致病疫霉侵染下表達(dá)量變化明顯;隨后又采用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證了11個(gè)miRNA的表達(dá)。靶基因預(yù)測及分析表明這些
3、miRNA參與植物-病原物互作過程。
其次,本研究從構(gòu)建的文庫中挑選出可能與抗病相關(guān)的miR396,通過生物信息學(xué)方法分析了番茄miR396的特性并采用實(shí)時(shí)定量PCR分析了它在致病疫霉、激素、高鹽、干旱脅迫下的表達(dá)特性。結(jié)果表明,miR396均能對(duì)上述脅迫條件作出響應(yīng),并在致病疫霉處理下變化最為明顯。
為進(jìn)一步了解miR396的功能特性,本文從番茄中克隆了MIR396基因,并且構(gòu)建了相應(yīng)的植物表達(dá)載體。miR396在
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