雞生殖系干細胞培養(yǎng)與睪丸組織移植研究.pdf

1、雞的生殖系干細胞包括原始生殖細胞(Primordial Germ Cells，PGCs)、性原細胞(Gonocyte Cells)和精原干細胞(Spermatogonial Stem Cells，SSCs)，它們都具有增殖和自我更新的能力，能在體外進行長期培養(yǎng)，是早期胚胎分化研究的體外模型。本研究分別以5.5日齡的雞胚生殖嵴，18日齡雞胚和出雛20-30日齡的公雞睪丸為實驗材料，對PGCs、性原細胞、SSCs進行長期培養(yǎng)，并采用PAS、

2、AKP和免疫組化染色進行干細胞特征鑒定，在細胞形態(tài)、體外培養(yǎng)和生物學特征鑒定等方面比較PGCs、性原細胞和SSCs這三種干細胞的差異性。 實驗研究結(jié)果如下： 1.在細胞形態(tài)上，PGCs個體要大于其它兩種細胞，PGCs的細胞集落呈鳥巢狀，細胞有偽足；性原細胞和SSCs細胞集落多呈葡萄串狀，沒有發(fā)現(xiàn)細胞偽足。 2.PGCs.性原細胞、SSCs原代培養(yǎng)24h后，PGCs的貼壁細胞數(shù)明顯少于性原細胞和SSCs(P<0.0

3、1)，但是三種細胞的增殖率差異不顯著(P>0.05)。 3.PGCs、性原細胞、SSCs傳代培養(yǎng)過程中，在貼壁細胞數(shù)量和細胞增殖率兩方面，都是PGCs最少，性原細胞其次，SSCs最多，三者之間差異極顯著(P<0.01)。 4.經(jīng)PAS染色法、AKP染色法和免疫化學染色鑒定，PGCs、性原細胞和SSCs均呈陽性，但是在AKP染色中，PGCs和性原細胞呈弱陽性，SSCs呈強陽性。 睪丸組織移植是將同種或者異種供體的睪

4、丸從體內(nèi)取出后切成組織塊，異位移植到受體的皮下、腹腔等血管豐富的部位。本實驗針對禽類的睪丸進行自體移植和異體移植的研究，對移植組織的生長發(fā)育狀況作較為全面的檢測，比較了不同移植部位、組織回收時間和供體種類對移植組織生長發(fā)育的影響。 實驗研究結(jié)果如下： 1.禽類睪丸組織自體移植和異體移植都是可行的。 2.在移植部位上，腹腔和腹腔皮下移植組織生長發(fā)育情況差異不顯著(P>0.05)，但是移植于腹腔皮下操作簡單，而且受體

5、雞的感染情況較少，組織存活率要高。因而腹部皮下是睪丸組織移植較為理想的移植部位。 3.根據(jù)供受體和移植部位的不同，睪丸移植組織的回收時間也有一定的差異。自體移植中，腹腔中的移植組織的理想回收時間為移植后3周，腹部皮下的移植組織理想回收時間為移植后1個月。異體移植的理想回收時間應為移植后120天。 4.在供體選擇上，40日齡的廣西土雞自體移植1個月后生長發(fā)育狀況良好，并且有高度活率的精子產(chǎn)生，因而適合作為睪丸組織自體移植的