副豬嗜血桿菌保護性抗原的篩選與鑒定.pdf

1、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)是豬的一種呼吸道共棲菌,在特定條件下可侵入機體而引起嚴重的全身性疾病,該病被稱為副豬嗜血桿菌病或革拉澤氏病(Gl(a)sser's disease)。以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎和肺炎為主要特征,是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴重的細菌性傳染病之一。
　　 HPS至少有15種血清型,不同地區(qū)和豬場流行的優(yōu)勢血清型不盡相同,血清型間的毒力和抗原性差異較大,缺乏有效的交叉免疫

2、保護力。因此,研制特異、敏感和快速的分型與診斷方法,鑒定有效的交叉保護性抗原對副豬嗜血桿菌病的有效防控具有重要意義。本研究運用動物試驗,從本實驗室鑒定出的HPS體內(nèi)誘導(dǎo)基因和應(yīng)激響應(yīng)基因中篩選保護性抗原,為診斷試劑和基因工程疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。
　　 對本實驗室運用轉(zhuǎn)錄序列選擇性捕獲(SCOTS)技術(shù)篩選到的38個HPS體內(nèi)誘導(dǎo)表達基因、39個熱應(yīng)激基因和36個貧鐵應(yīng)激基因,進行了生物信息學(xué)分析,根據(jù)其細胞定位、疏水性、抗原性預(yù)

3、測結(jié)果,篩選和克隆了其中33個基因,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達,純化了其中24種重組蛋白。用重組蛋白免疫小鼠制備了DnaK、GidA、GmhA、ComJ、RffA、SiaB、AlaS和Mivm八種多克隆抗體。用免疫熒光染色和流式細胞術(shù)研究了這8種蛋白在HPS中的細胞定位及與豬肺上皮細胞(St.Judeporcine lung cell,SJPLC)的相互作用,結(jié)果表明,DnaK、PilA、RffA和SiaB為HPS的表面蛋白,GidA、Pil

4、A、RffA和SiaB能夠與SJPLC細胞結(jié)合。
　　 將重組蛋白DnaK、GidA、PilA、RffA和SiaB分別與氫氧化鋁佐劑混合制備成亞單位疫苗,與佐劑對照和HPS滅活疫苗對照分別免疫30日齡仔豬各3頭,間隔2周加強免疫2次,二周后用2×1010 CFU的HPS血清5型0165強毒株攻擊。根據(jù)仔豬存活率、抗體水平、臨床癥狀和病理剖檢情況進行綜合評價,結(jié)果顯示:Ⅳ型菌毛蛋白PilA具有較好的免疫保護力。由于該抗原基因在HP