一株O混合血清型豬水腫病大腸桿菌部分生物學(xué)特性研究.pdf

1、大腸桿菌病是極為常見(jiàn)的畜禽傳染病，經(jīng)常引起地區(qū)性散發(fā)或小范圍爆發(fā)，尤其是對(duì)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的危害較嚴(yán)重，經(jīng)濟(jì)損失較大。致病性大腸桿菌可引起仔豬黃痢、仔豬白痢、仔豬水腫病及斷奶仔豬腹瀉等，因大腸桿菌血清型很多，各血清型之間有效的交叉保護(hù)性差， 豬場(chǎng)一旦出現(xiàn)病例常使用大量的抗菌素治療，引起耐藥菌株的出現(xiàn)和持續(xù)存在，不易根除。不同地區(qū)豬致病性大腸桿菌流行的主要血清型不同，因此，在大腸桿菌病的免疫預(yù)防中，很難顧全其血清型的多樣性、易變性，經(jīng)常導(dǎo)致免

2、疫失敗。
　　 本實(shí)驗(yàn)室在對(duì)一例豬水腫病診斷中分離得到一株O139,142,26混合血清型大腸桿菌，此前尚未見(jiàn)報(bào)道。為了探求這株O混合血清型大腸桿菌的部分生物學(xué)特性，開(kāi)展了如下研究。
　　 應(yīng)用鳥槍法擴(kuò)增了O139,142,26的O-抗原基因，測(cè)序結(jié)果顯示擴(kuò)增的O-抗原基因長(zhǎng)度為11771bp。通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其具有10個(gè)開(kāi)放閱讀框架及功能基因種類。經(jīng)與發(fā)表的大腸桿菌O139、O26和O142的

3、O-抗原基因序列及O-抗原糖基鏈的結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，近化樹分析，跨膜蛋白的結(jié)構(gòu)分析以及對(duì)乳糖前體（Glc）添加乙酰基的機(jī)制分析，結(jié)果顯示該O混合血清型大腸桿菌的O-抗原基因與大腸桿菌O139 O-抗原基因進(jìn)化關(guān)系最近。
　　 實(shí)驗(yàn)對(duì)致病性大腸桿菌可能含有的12種毒力因子ST、LT、SLT-Ⅱe、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ、FedA、K88、 K99、987P、F41、eaeA和irp2進(jìn)行了PCR鑒定，檢測(cè)到了志賀樣毒素Ⅱ型變異體（Sh

4、iga-like toxin Ⅱ variant, SLT-Ⅱe）基因和F18ab菌毛FedA亞單位基因。用多粘菌素法提取毒素，并對(duì)粗提毒素的蛋白含量、對(duì)小鼠和Vero細(xì)胞的半數(shù)致死量進(jìn)行了測(cè)定。夾心ELISA方法確定該毒素為SLT-Ⅱe，對(duì)小鼠的半數(shù)致死量（LD50）為135.5μg， Vero cell半數(shù)致死量（LD50）為1.05×10-5μg，全菌腹腔注射半數(shù)致死量LD50為6.5×107CFU。
　　 生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)

5、果顯示，大腸桿菌O139,142,26在相同培養(yǎng)條件下比參考菌株O138、O139生長(zhǎng)緩慢。
　　 大腸桿菌O139,142,26與常見(jiàn)的10種藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)顯示，該菌對(duì)紅霉素和青霉素不敏感，對(duì)氨芐青霉素和羧芐青霉素較敏感，對(duì)其他7種藥物均敏感。
　　 針對(duì)大腸桿菌血清型眾多，難以產(chǎn)生交叉保護(hù)的特點(diǎn)，從實(shí)際應(yīng)用的角度制備了大腸桿菌O139,142,26滅活疫苗，通過(guò)免疫保護(hù)性試驗(yàn)和免疫原性試驗(yàn)，結(jié)果顯示大腸桿菌O139,