雞大腸桿菌O1和O78血清型菌蛻的制備和應(yīng)用的初步研究.pdf

1、由禽致病性大腸桿菌(Avain pathogenic Escherichia coli，APEC)所引起的局部或者全身性感染的疾病統(tǒng)稱(chēng)為禽大腸桿菌病，其主要的臨床癥狀有胚胎死亡、大腸桿菌性敗血癥、腫頭綜合征、臍炎卵黃囊感染、大腸桿菌性肉芽腫等，該病可以產(chǎn)生多種器官病變，主要病理變化有氣囊病、臍炎、蜂窩織炎、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎等一系列病癥。
　　 本研究利用臨床分離的O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌分別制備了菌蛻疫

2、苗，并接種雛雞進(jìn)行了免疫保護(hù)試驗(yàn)。本研究取得的結(jié)果如下:
　　 1.雞大腸桿菌O1、O78菌蛻的制備用PCR擴(kuò)增噬菌體裂解蛋白的基因E，將其連接到pMD-18T載體，測(cè)序發(fā)現(xiàn)有一個(gè)堿基發(fā)生了突變。進(jìn)一步對(duì)突變基因進(jìn)行了定點(diǎn)突變，經(jīng)測(cè)序正確后與溫控表達(dá)載體pBV220連接，構(gòu)建了溶菌表達(dá)質(zhì)粒pBV220-Em，并對(duì)臨床分離的O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌菌株分別進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化，獲得了重組大腸桿菌O1-E和大腸桿菌O78-E。將兩個(gè)

3、重組菌株分別在29℃增菌培養(yǎng)，42℃誘導(dǎo)溶菌，制備了O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌的菌蛻。結(jié)果顯示溶菌滅活效率約為95％，一般在1h左右開(kāi)始溶菌，2h-2.5h左右誘導(dǎo)結(jié)束。對(duì)于在溶菌過(guò)程中尚未滅活的大腸桿菌采用反復(fù)凍融和添加氯霉素的方法進(jìn)行滅活。
　　 2.制備的菌蛻疫苗進(jìn)行雛雞免疫實(shí)驗(yàn)，研究交叉免疫保護(hù)率將不同濃度的雞大腸桿菌O1、雞大腸桿菌O78分別皮下注射8日齡的雛雞，測(cè)得雞大腸桿菌O78的LD50為8.98×106C

4、FU，大腸桿菌O1分離株無(wú)明顯致病性。分別用制各的雞大腸桿菌O1、O78菌蛻和甲醛滅活的雞大腸桿菌免疫7日齡雛雞，兩周后所有免疫組皮下注射2LD50劑量的大腸桿菌O78。免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:雞大腸桿菌O1菌蛻的免疫保護(hù)率為80％，雞大腸桿菌O78菌蛻的免疫保護(hù)率為70％，大腸桿菌O1、大腸桿菌O78兩種甲醛滅活苗的免疫保護(hù)率分別為50％和60％。兩種菌蛻免疫組比甲醛滅活組免疫效果好，其中雞大腸桿菌O1菌蛻比雞大腸桿菌O78菌蛻免疫保護(hù)