禽致病性大腸桿菌的分離鑒定與O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基因缺失滅活疫苗的初步研究.pdf

1、禽致病性大腸桿菌主要引起禽類的心包炎、肝周炎、氣囊炎、輸卵管炎、腹膜炎等，并導(dǎo)致不同程度死亡率，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究采集江蘇地區(qū)疑似大腸桿菌病的病雞的組織進(jìn)行大腸桿菌的分離鑒定，探究其致病性、耐藥性;隨后進(jìn)行基因缺失多價滅活疫苗免疫保護(hù)效果的研究。為禽大腸桿菌病的防治提供理論依據(jù)，同時為多價滅活疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　一禽致病性大腸桿菌的分離鑒定及致病性研究
　　本研究對江蘇省部分地區(qū)疑似大腸桿菌病的病死雞進(jìn)

2、行大腸桿菌的分離與鑒定，共分離鑒定了162株大腸桿菌。通過玻板凝集和試管凝集試驗(yàn)對大腸桿菌分離株進(jìn)行O血清型鑒定，其中定型菌株130株，未定型菌株32株，定型率為80.25％。在130株定型菌株中鑒定出34種O血清型，其中主要血清型有O78、O88、O65、O161、O1、O24、O13，占定型菌株的66.92％。通過PCR方法對分離到的162株大腸桿菌進(jìn)行iss、iroN、tsh、cvaC、iutA及irp26個與禽致病性大腸桿菌致病

3、力密切相關(guān)的毒力基因的檢測，其檢出率分別為83.33％、80.86％、45.06％、48.76％、75.92％、58.02％，同時攜帶6個毒力基因的菌株有37株，占總分離菌株的22.83％。選取本研究分離鑒定的菌株64株（主要血清型45株）進(jìn)行1日齡易感雞的致病性試驗(yàn)，結(jié)果64個分離株中有55株屬于高中致病性菌株，占85.94％。其中，高致病性菌株40株（主要血清型33株），中度致病性菌株15株（主要血清型8株），低致病性菌株9株。通過

4、1日齡致病性試驗(yàn)并結(jié)合6個與禽致病性大腸桿菌致病力密切相關(guān)的毒力基因的檢測，可以判定本研究分離菌中至少有80％的分離菌具有中高致病力。二禽致病性大腸桿菌耐藥性研究
　　本研究選取了16種抗生素（氨芐青霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、先鋒霉素V、磺胺異噁唑、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、卡那霉素、左旋氧氟沙星、氟苯尼考、新霉素、阿奇霉素、諾氟沙星、多粘菌素B、環(huán)丙沙星）對60個分離株進(jìn)行藥物敏感性的篩選。60個分離株對強(qiáng)力霉素、氨芐青霉素、四

5、環(huán)素、磺胺異嗯唑及環(huán)丙沙星的耐藥率在80％及以上;對阿奇霉素、慶大霉素及多粘菌素B的耐藥率在50％以下;對多粘菌素B的敏感性最高。60個分離株均出現(xiàn)不同程度的多重耐藥情況。其中，受檢菌株中耐13種藥物的菌株最多，占總受檢菌株的25.0％(15/60);有63.33％(38/60)的受檢菌株對9種及以上藥物耐藥。由此可知目前禽致病性大腸桿菌的耐藥性嚴(yán)重且耐藥譜比較廣。
　　三禽致病性大腸桿菌O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基

6、因缺失滅活疫苗的初步研究
　　本研究利用本實(shí)驗(yàn)室保存的O1、O2、O78血清型的野生株及其lpxL、lpxM突變株制備油佐劑多價滅活疫苗，免疫后對其特異性抗體反應(yīng)水平、對野生株的攻毒保護(hù)率及免疫雞內(nèi)臟組織的病理變化進(jìn)行研究。研究數(shù)據(jù)顯示，本研究制備的疫苗的血清特異性抗體水平與攻毒保護(hù)率均優(yōu)于商品疫苗組，突變株疫苗的安全性和免疫應(yīng)激性優(yōu)于野生株疫苗。不同佐劑對疫苗免疫保護(hù)效果的影響:突變株Montanide TSA71VG佐劑疫苗組

7、的特異性抗體水平與保護(hù)率優(yōu)于白油佐劑疫苗;對O1、O2、O78毒株的保護(hù)率:突變株MontanideTSA71VG佐劑疫苗分別為86.67％、93.33％及100％，白油佐劑疫苗分別為對80％、86.67及86.67。不同免疫次數(shù)對免疫保護(hù)效果的影響:將突變株Montanide TSA71VG佐劑疫苗對雞進(jìn)行一次免疫后攻毒，其免疫保護(hù)率要優(yōu)于商品疫苗的二次免疫的免疫保護(hù)率，與突變株Montanide TSA71VG佐劑疫苗二次免疫組相比