牛IL-2和IFN-γ對Asia1型口蹄疫病毒G-H環(huán)多肽免疫效果的影響.pdf

1、口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒(FMD virus, FMDV)所致的一種偶蹄動物共患的急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病的暴發(fā)會給國家?guī)砭薮蟮慕?jīng)濟和政治影響。傳統(tǒng)疫苗在該病的防治過程中雖然起著舉足輕重的作用，但其本身產(chǎn)生的副作用使得安全高效新型FMD疫苗的研制成為了必要。目前，最常見的新型FMD疫苗是生物合成多肽疫苗。多肽疫苗具有安全穩(wěn)定、易于生產(chǎn)、針對性強的優(yōu)點，但免疫原性一般較差。

2、因此，使用多肽疫苗進行免疫時加入合適的佐劑是必不可少的。本研究從細胞因子佐劑的研究出發(fā)，將牛IL-2、IFN-γ真核表達質(zhì)粒和牛IFN-γ成熟蛋白（pr-mBoIFN-γ）分別同Asia1型FMDV G-H環(huán)多肽（FMDV VP1蛋白137-158aa）融合蛋白聯(lián)合免疫小鼠，觀察重組牛IL-2和IFN-γ對FMDV G-H環(huán)多肽免疫效果的影響。
　　 本研究對G-H環(huán)多肽融合蛋白（G-H）及pr-mBoIFN-γ進行了原核表達并

3、純化，構建了含有信號肽序列的牛IL-2和牛IFN-γ真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ。為了檢測構建的真核表達質(zhì)粒是否能在哺乳動物細胞內(nèi)正常表達，將兩種質(zhì)粒和空載體pcDNA3.1分別轉(zhuǎn)染BHK21細胞并利用間接免疫熒光試驗體外鑒定其表達。結(jié)果顯示，pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ轉(zhuǎn)染后的細胞出現(xiàn)了明亮的綠色熒光，而空載體轉(zhuǎn)染后的細胞則沒有熒光出現(xiàn)，這說明

4、真核表達質(zhì)粒 pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ在BHK21細胞中進行了成功表達。將兩種細胞因子的真核表達質(zhì)粒和pr-mBoIFN-γ分別與G-H組合免疫昆明鼠，并設立陰陽性對照。用間接ELISA試驗和病毒中和試驗 (Virus Neutralization Test, VNT) 檢測免疫鼠的體液免疫狀況。結(jié)果顯示，首次免疫后各組小鼠血清抗體增長不明顯；第2次、第3次免疫后陰性對照PBS免疫組和G-H+

5、pcDNA3.1免疫組的抗體水平?jīng)]有明顯變化，而G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組、G-H+pr-mBoIFN-γ免疫組和G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2免疫組的抗體水平顯著高于陰性對照組卻又顯著低于滅活疫苗免疫組(P<0.05)。此外，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2、G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組中和抗體滴度 (neutralizing antibody titer, NAT)顯著高于

6、G-H＋FA免疫組，表明與弗氏佐劑比較，細胞因子分子佐劑在免疫中會起到更為顯著的效果。淋巴細胞增殖試驗結(jié)果表明，首次免疫后35天，G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組小鼠淋巴細胞顯示出了最高的增殖水平，其次是G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2免疫組和G-H+Pr-mBoIFN-γ免疫組，三者的淋巴細胞增殖水平均顯著高于G-H+pcDNA3.1免疫組和PBS免疫組。細胞因子檢測試驗結(jié)果顯示，所有免疫組中，滅活疫苗免疫組誘

7、導了最高水平的IL-4，G-H+Pr-mBoIFN-γ免疫組誘導了最高水平的IFN-γ，這與抗體檢測試驗和淋巴細胞增殖試驗檢測結(jié)果是一致的。而與G-H+pcDNA3.1免疫組比較，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2、pcDNA3.1-pBoIFN-γ和G-H+pr-mBoIFN-γ免疫組無論是IL-4的相對表達水平還是IFN-γ的相對表達水平均有顯著的提高，進一步說明rBoIL-2和rBoIFN-γ對G-H免疫小鼠產(chǎn)生的體液免疫和