HMME-PDT致犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的研究.pdf

1、犬乳腺腫瘤是獸醫(yī)臨床常見的一種腫瘤性疾病。目前，乳腺癌一直以外科手術(shù)治療為主，并出現(xiàn)了擴(kuò)大根治和超根治術(shù)，但并未能明顯提高遠(yuǎn)期生存率。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，光動(dòng)力學(xué)療法（photodynamic therapy，PDT）成為治療惡性腫瘤研究的新領(lǐng)域，其作用因素有光敏劑、光以及氧分子。光敏劑可以被病變靶組織選擇性的吸收，在合適波長(zhǎng)的光的激發(fā)下，通過能量的轉(zhuǎn)換產(chǎn)生活性氧物質(zhì)，進(jìn)而造成對(duì)靶組織的損傷，是一種非常有發(fā)展前景的能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死的

2、腫瘤治療方法。血卟啉單甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether，HMME）是一種新型的卟啉類光敏劑，并已在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中證明了它的高效性。但目前國(guó)內(nèi)外HMME-PDT對(duì)犬乳腺癌細(xì)胞作用研究較少。本課題采用這種新型光敏劑血卟啉單甲醚，用波長(zhǎng)為632.8nm的He-Ne激光照射犬乳腺腫瘤細(xì)胞系，探討其對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞抑制的機(jī)理，為光動(dòng)力學(xué)對(duì)腫瘤疾病的治療提供理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)選用從自然發(fā)生乳腺

3、腫瘤病例的轉(zhuǎn)移病灶分離培養(yǎng)的細(xì)胞系，常規(guī)傳代培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞按分組：空白對(duì)照組、單獨(dú)激光組、單獨(dú)光敏劑組和實(shí)驗(yàn)組（激光照光+光敏劑）對(duì)體外培養(yǎng)的犬乳腺癌細(xì)胞株CHMm進(jìn)行HMME-PDT實(shí)驗(yàn)，用MTT法檢測(cè)其光密度值OD490，觀察不同實(shí)驗(yàn)條件PDT對(duì)犬乳腺癌細(xì)胞在體外的抑制作用，繪制其抑制率曲線；然后苔盼藍(lán)拒染檢測(cè)細(xì)胞的死亡率；用Hochest33258染色和電泳技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；用流式胞儀術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；用比色法檢測(cè)MD

4、A、NO的含量和SOD、GSH-PX的活性；用放免法檢測(cè)IL-2和IL-6的含量。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：空白對(duì)照組、單獨(dú)光敏劑組（HMME20μg/mL）及單獨(dú)激光組（2.8J/cm2）對(duì)細(xì)胞增殖均無(wú)明顯影響，而HMME-PDT（HMME20μg/mL+2.8J/cm2）組處理后細(xì)胞增殖明顯受到抑制，因此說明HMME-PDT作用對(duì)體外培養(yǎng)的犬乳腺癌細(xì)胞株CHMm的生長(zhǎng)有明顯抑制作用，在一定范圍內(nèi)，光動(dòng)力效應(yīng)與光敏劑濃度和光照劑量均呈

5、相關(guān)關(guān)系；HMME-PDT處理后用Hochest33258染色、彗星電泳圖片可見，細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的凋亡現(xiàn)象，而且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡更加明顯；細(xì)胞周期各時(shí)間點(diǎn)G0/G1期比例增加在12、24、48h與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01)，而S期和G2/M期比例降低在24、48h與對(duì)照組比較以有極顯著差異（P<0.01），都呈時(shí)間依賴性變化，但是S和G2/M變化不如G0/G1明顯，說明HMME-PDT的抑癌作用機(jī)理與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)，具體表