紫杉醇致體外培養(yǎng)犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)及抗氧化功能影響的研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡發(fā)生于所有的腫瘤組織中，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?；熕幬镏饕ㄟ^誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡達(dá)到治療效果，因此，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡成為研究腫瘤治療的熱點(diǎn)。具有選擇性廣、毒副作用小，耐藥性低的天然藥物是中藥研究抗腫瘤的重要方向。紫杉醇是一種新型天然廣譜抗腫瘤藥物，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制主要是通過抑制細(xì)胞有絲分裂，使細(xì)胞阻滯于G2/M期，從而阻斷正常的有絲分裂和細(xì)胞增殖。犬乳腺腫瘤是獸醫(yī)臨床常見的一種腫瘤性疾病，紫杉醇在犬乳腺腫瘤方面作用的研究

2、國(guó)內(nèi)外尚無報(bào)道，并且犬與人類的關(guān)系密切，所處環(huán)境和致癌原因也極其相似，因此用犬來作為腫瘤的模型并對(duì)其進(jìn)行研究，探討紫杉醇誘導(dǎo)動(dòng)物腫瘤細(xì)胞的抗癌機(jī)制，對(duì)今后治療動(dòng)物的腫瘤及人類癌癥治療方案的制定有著非常重要的意義。
　　 本課題以體外培養(yǎng)犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMm株為模型，加入不同濃度的紫杉醇進(jìn)行處理，于培養(yǎng)后24、48、72h分別對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性作用和細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化以及SOD、CAT、MDA等抗氧化功能因子進(jìn)行測(cè)定，分析其作用

3、時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系，探討紫杉醇誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化及抗氧化功能的變化，為更進(jìn)一步研究紫杉醇誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制以及為臨床應(yīng)用紫杉醇治療癌癥提供更可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：
　　 1．通過MTT比色法和臺(tái)盼蘭排斥實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了紫杉醇對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的變化，結(jié)果表明隨著紫杉醇濃度增加，培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，抑制率逐漸上升，細(xì)胞活性逐漸下降，具有時(shí)間-劑量依賴性；通過乳酸脫氫酶活性的測(cè)定，結(jié)果顯示在同一時(shí)間點(diǎn)，不同濃度的紫杉醇組

4、間差異均極顯著（P<0.01）；在不同時(shí)間點(diǎn)，24h1μmol/L的紫杉醇與48h0.1μmol/L的紫杉醇與72h0.01μmol/L的紫杉醇比較不顯著（p>0.05），其他各組間比較差異均極顯著（P<0.01），表明紫杉醇能夠損傷犬乳腺腫瘤細(xì)胞胞膜的完整性，影響DNA和RNA合成，增加犬乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)的LDH漏出率，LDH活性增加，發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，具有時(shí)間-濃度依賴性。
　　 2．應(yīng)用倒置顯微鏡下觀察犬乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)情況

5、；AO/EB雙熒光染色熒光顯微鏡下和透射電鏡下觀察犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。表現(xiàn)為對(duì)照組細(xì)胞完整，細(xì)胞分布均勻，內(nèi)可見多個(gè)細(xì)胞核，核仁大而明顯，微絨毛和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，染色質(zhì)分布均勻；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞質(zhì)濃縮、染色質(zhì)凝集、細(xì)胞膜表面微絨毛消失，胞質(zhì)內(nèi)有許多空泡樣變，凋亡小體形成，線粒體膜不完整，腫脹。結(jié)果表明紫杉醇可以誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且隨著時(shí)間推移和藥物濃度的增加凋亡加劇。
　　 3．用不同濃度的紫杉醇作用于犬乳腺腫瘤細(xì)