紫杉醇微粉抗PC-3腫瘤細(xì)胞活性及其凋亡機制研究.pdf

1、為了提高紫杉醇的生物水溶性,增加其生物利用度,并降低毒性,利用SAS超微粉制備技術(shù)制備了紫杉醇微粉,進(jìn)而對其抗腫瘤活性進(jìn)行評價,發(fā)現(xiàn)與紫杉醇相比,紫杉醇微粉依然具有良好的腫瘤抑制作用,具有廣闊的發(fā)展前景。本論文主要對紫杉醇微粉的抗腫瘤作用及凋亡機制進(jìn)行研究。研究結(jié)果如下:
　　 1.應(yīng)用MTT法研究紫杉醇微粉對腫瘤細(xì)胞株生長的影響,包括:人淋巴腺癌CEM細(xì)胞、乳腺癌MCF-7細(xì)胞、肺癌A549細(xì)胞、前列腺癌PC-3細(xì)胞,結(jié)果表明

2、紫杉醇微粉作用四種腫瘤細(xì)胞株48h的IC50值分別為2.06±1.4μM,5.89±1.07μM,10.56±5.07μM和0.62±0.17μM;而陽性對照紫杉醇作用四種細(xì)胞48h的IC50值分別為1.73±0.13μM,3.82±1.25μM,15.71±3.21μM和1.60±1.25μM。結(jié)果表明紫杉醇微粉對PC-3細(xì)胞的敏感性最高,并且其體外抑制作用高于紫杉醇。
　　 2.選擇S180荷瘤鼠動物模型研究紫杉醇微粉體內(nèi)抗

3、腫瘤活性,當(dāng)給藥劑量為10mg/kg時,紫杉醇微粉和紫杉醇的腫瘤抑制率分別為58.66％和61.16％,表明紫杉醇微粉在體內(nèi)對S180腫瘤細(xì)胞生長有很好的抑制作用,且作用效果與紫杉醇相當(dāng)。
　　 3.利用透射電鏡及激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行PC-3細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)研究,結(jié)果0.5μM的紫杉醇微粉處理PC-3細(xì)胞48h后,可觀察到明顯的PC-3細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化,并且其誘導(dǎo)PC-3腫瘤細(xì)胞凋亡的程度與紫杉醇相當(dāng)。
　　 4.利用

4、流式細(xì)胞儀分析了紫杉醇微粉以及紫杉醇處理PC-3細(xì)胞后對細(xì)胞周期的影響,結(jié)果不同濃度的紫杉醇微粉和紫杉醇作用PC-3細(xì)胞48h后,細(xì)胞周期發(fā)生了改變。主要作用于G2/M期,出現(xiàn)了G2/M期細(xì)胞大量滯留的現(xiàn)象,并且隨著劑量的增加,這種變化愈加明顯。因此,紫杉醇微粉和紫杉醇都能誘導(dǎo)PC-3腫瘤細(xì)胞凋亡,與引起G2/M期細(xì)胞大量累積有關(guān)。
　　 5.采用Rh123染色,利用流式細(xì)胞儀檢測紫杉醇微粉對PC-3細(xì)胞線粒體膜電位變化的影響。

5、結(jié)果顯示PC-3細(xì)胞經(jīng)過0.5μM的紫杉醇微粉作用后,隨著作用時間的延長,低熒光強度部分細(xì)胞所占百分比逐漸增加,高于對照組。線粒體膜電位的降低暗示了紫杉醇微粉可能通過降低線粒體膜電位而引起PC-3細(xì)胞功能障礙。
　　 6.采用Fluo-3 AM熒光探針染色,利用流式細(xì)胞儀檢測紫杉醇微粉對PC-3細(xì)胞Ca2+濃度變化的影響。結(jié)果顯示PC-3細(xì)胞經(jīng)過不同濃度的紫杉醇微粉作用24h后,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度有所升高,高于對照組。說明紫杉醇

6、微粉在啟動了細(xì)胞線粒體凋亡途徑后可能調(diào)節(jié)了Ca2+水平。
　　 7.采用熒光酶法檢測了紫杉醇微粉處理PC-3細(xì)胞引起的細(xì)胞內(nèi)ATP水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PC-3腫瘤細(xì)胞經(jīng)過不同濃度的紫杉醇微粉作用不同時間后,均可引起細(xì)胞內(nèi)ATP水平的降低,這一結(jié)果進(jìn)一步證明了紫杉醇微粉和紫杉醇都是通過線粒體途徑而引起PC-3腫瘤細(xì)胞的凋亡。
　　 8.采用比色法檢測了紫杉醇微粉處理PC-3細(xì)胞引起的細(xì)胞內(nèi)過氧化氫濃度的變化。結(jié)果表明,紫

7、杉醇微粉作用PC-3腫瘤細(xì)胞1h后,可以誘導(dǎo)細(xì)胞中過氧化氫濃度的升高,且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。此外,如果在加藥組的PC-3細(xì)胞中同時加入線粒體PTP專一阻斷劑,那么PC-3細(xì)胞中過氧化氫的濃度會有所降低,此結(jié)果表明,紫杉醇微粉誘導(dǎo)PC-3腫瘤細(xì)胞凋亡可能是通過線粒體m通路完成的,且與氧化無關(guān)。
　　 本文體內(nèi)和體外實驗均表明了紫杉醇微粉具有很好的抗腫瘤活性,其對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。從多方面闡明了紫杉醇微