斑馬魚肝臟微細(xì)結(jié)構(gòu)及膽管系統(tǒng)的研究.pdf

1、斑馬魚（Brachydaniorerio）具有個體小、易養(yǎng)殖、繁殖能力強、生殖周期短、遺傳背景清晰、體外受精且胚胎發(fā)育透明等特點。廣泛應(yīng)用于遺傳發(fā)育、藥物篩選、毒性試驗以及分子生物學(xué)等領(lǐng)域的研究。斑馬魚已經(jīng)成為繼小鼠、果蠅和線蟲之后的又一模式動物。肝臟是魚體最大的腺體，在物質(zhì)代謝、解毒、凝血和防御等生命活動過程中起著至關(guān)重要的作用。迄今為止，一些學(xué)者主要從基因水平探究斑馬魚肝臟的發(fā)育情況以及一些人類疾病動物模型，從形態(tài)學(xué)角度來研究斑馬魚

2、肝臟的報道較少。本研究的目的在于從形態(tài)學(xué)角度來闡述和解讀斑馬魚肝臟的組織構(gòu)造，為進(jìn)一步研究斑馬魚肝臟的發(fā)育與功能代謝提供形態(tài)學(xué)依據(jù)，并為斑馬魚肝臟三維構(gòu)建和結(jié)構(gòu)量化奠定基礎(chǔ)。
　　 試驗Ⅰ斑馬魚肝臟的顯微和超微結(jié)構(gòu)應(yīng)用光鏡和透射電鏡技術(shù)對斑馬魚肝臟的組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察。結(jié)果表明，斑馬魚肝臟沒有典型的門管區(qū)，靜脈和膽管隨機地分布在肝實質(zhì)中，很難觀察到動脈。肝板由兩層并列的肝細(xì)胞排列成雙層板狀結(jié)構(gòu)，以中央靜脈為中心呈散射狀

3、分布，肝板（肝細(xì)胞索）呈彎曲、分支和吻合狀態(tài)，其間是血竇。肝細(xì)胞核大而圓，核仁分區(qū)明顯，核孔數(shù)目多，且密度大，呈現(xiàn)細(xì)胞代謝活躍旺盛的形態(tài)。胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（RER）既有管狀結(jié)構(gòu)也有扁平囊狀結(jié)構(gòu)，扁平囊狀結(jié)構(gòu)的RER呈區(qū)域化的層層排列，可達(dá)20多層。線粒體成群分布，并且與RER緊密接觸，為RER合成蛋白質(zhì)提供能量。本實驗通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)細(xì)胞質(zhì)富含線粒體、RER、核糖體時，核孔的數(shù)目多，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)一定量的溶酶體，糖原在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有少量的聚

4、集。當(dāng)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的糖原分布時，則核孔的數(shù)目較少，且細(xì)胞器也較少。表明，當(dāng)細(xì)胞的合成活性旺盛時，細(xì)胞內(nèi)的大部分糖原被消耗利用，以保證肝細(xì)胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)正常代謝，而線粒體也在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的過程中提供能量。本文也對內(nèi)皮細(xì)胞、貯脂細(xì)胞、紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞進(jìn)行了描述。并對斑馬魚肝臟的結(jié)構(gòu)與其他硬骨魚類進(jìn)行了比較。
　　 試驗Ⅱ斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)的研究應(yīng)用光鏡、透射電鏡技術(shù)以及免疫組織化學(xué)方法，系統(tǒng)觀察斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)組織結(jié)構(gòu)和超

5、微結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)在肝實質(zhì)內(nèi)呈樹枝狀分布。膽管系統(tǒng)由細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間膽道、前膽小管，膽小管和膽管構(gòu)成。細(xì)胞內(nèi)膽道起源于細(xì)胞核附近，并且存在向細(xì)胞表面遷移的現(xiàn)象。前膽小管由前膽小管上皮細(xì)胞（BP細(xì)胞）和肝細(xì)胞共同構(gòu)成管道的管壁。BP細(xì)胞位于肝細(xì)胞之間，胞質(zhì)少，細(xì)胞核呈狹長形，通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，BP細(xì)胞與肝細(xì)胞通過緊密連接進(jìn)行細(xì)胞間的通訊活動。膽小管管壁通常由2～4個上皮細(xì)胞構(gòu)成，膽小管上皮細(xì)胞與肝細(xì)胞之間直接接觸，并沒

6、有基底膜使之相隔。本實驗通過透射電鏡還觀察到了由一個上皮細(xì)胞質(zhì)膜突起再內(nèi)折形成的膽小管，并通過一個縱向的連接復(fù)合體密封管道。膽管的管壁上皮細(xì)胞由立方上皮細(xì)胞或柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成，膽管外有結(jié)締組織環(huán)繞。此外，淋巴細(xì)胞也參與了膽管管壁上皮細(xì)胞的構(gòu)成，表明膽管存在粘膜免疫的應(yīng)答。前膽小管和膽小管是連接細(xì)胞內(nèi)膽道和膽管的部分，因此，本實驗認(rèn)為前膽小管和膽小管相當(dāng)于哺乳動物的赫林管。Mg2+-ATP酶反應(yīng)顯示，膽管系統(tǒng)被染成棕黑色，交織成網(wǎng)。通過免