TCDD或β-NF誘導(dǎo)斑馬魚肝和鰓MROD酶活力及CYP1A蛋白表達.pdf

1、2，3，7，8-四氯二苯并二噁英(2，3，7，8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)是二噁英類化合物(Dioxin-like compounds，DLCs)中最具代表性的一種，β-萘黃酮(beta-naphthoflavone，β-NF)是多環(huán)芳烴(polyaromatic hydrocarbons，PAHs)的典型代表，它們主要通過與芳烴受體(aryl hydrocarbon receptor，AhR)

2、結(jié)合而發(fā)揮毒性作用。在對水生生態(tài)環(huán)境污染監(jiān)測中，魚類細胞色素P4501A(Cytochrome P4501A，CYP1A)的誘導(dǎo)已被作為暴露于PAHs、多氯聯(lián)苯、DLCs的早期預(yù)警信號及高度敏感的生物反應(yīng)。本研究通過觀察在β-NF暴露下斑馬魚多個臟器的組織病理變化，找出斑馬魚在供試毒物暴露下的敏感臟器，然后從蛋白分子水平上初步探討了β-NF或TCDD對斑馬魚的毒理學(xué)效應(yīng)及其機制，檢測了β-NF或TCDD暴露下斑馬魚肝臟和鰓CYP1A依賴

3、性7-甲氧基-異吩噁唑酮-脫甲基酶(7-methoxyresoufin-O-demethylase，MROD)活力的變化及蛋白質(zhì)誘導(dǎo)量變化，并比較了發(fā)生在不同水平的毒理學(xué)效應(yīng)之間的相互關(guān)系，為篩選出合適的生物標志物，檢測水環(huán)境、飼料中有關(guān)污染物提供試驗依據(jù)。所獲得的研究結(jié)果如下： 1.病理組織學(xué)研究。將供試斑馬魚分成6個劑量組：β-NF暴露組(25μg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、200μgL-1、400μg·

4、L-1)以及1個空白對照組。暴露7d后，β-NF對斑馬魚的肝臟和鰓有著明顯的毒性作用，能引起肝細胞脂肪變性、肝細胞索排列紊亂，肝竇狀隙擴張；鰓上皮細胞腫脹變形，柱細胞異形，分泌物顯著增加，但對斑馬魚的其他組織結(jié)構(gòu)的影響不明顯。暴露14d后，與對照組相比，β-NF暴露造成斑馬魚的肝臟、鰓、腸、脾臟、心臟等臟器均受到不同程度的損傷，但以肝臟和鰓最為明顯。 2.MROD分析。將供試斑馬魚分成9個劑量組，每組25尾：β-NF暴露組(25

5、lμg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1)，TCDD處理組(0.05μg·L-1、0.10μg·L-1、0.2μg·L-1和0.4μg·L-1)以及空白對照組。暴露48h后，與對照組相比，斑馬魚肝臟和鰓MROD活性均被分別被上述2種供試化學(xué)物顯著誘導(dǎo)(P<0.01)，且MROD活性的增加與染毒劑量呈現(xiàn)明顯的劑量.效應(yīng)關(guān)系。β-NF暴露組斑馬魚鰓MROD活性比肝臟敏感，TCDD暴露組斑馬魚肝臟MROD活性比

6、鰓敏感。 3.CYP1A蛋白誘導(dǎo)。將供試斑馬魚分成9個劑量組，每組30尾：β-NF暴露組(25μg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1)，TCDD處理組(0.05μg·L-1、0.1μg·L-1、0.2μg·L-1、0.4μg·L-1)以及1個空白對照組。經(jīng)Western blot檢驗發(fā)現(xiàn)，暴露48h后，與對照組相比，斑馬魚肝臟和鰓CYP1A蛋白均分別被上述2種供試化學(xué)物顯著誘導(dǎo)(P<0.01)，且