大島野路菊CcSOS1基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、土壤中過多的Na+會(huì)導(dǎo)致植物產(chǎn)生鹽害，嚴(yán)重影響植物生長(zhǎng)和發(fā)育，而質(zhì)膜型Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以將植物細(xì)胞內(nèi)多余的Na+排出胞外，是植物抵御鹽脅迫的主要方式之一，在植物耐鹽性方面起著重要的作用。
　　 大島野路菊為菊科菊屬草本植物，原產(chǎn)日本沿海地區(qū)，具有良好的耐鹽能力。本研究通過GenBank上登錄的其它植物質(zhì)膜型Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SOS1的保守序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，利用RT-PCR和RACE等技術(shù)克隆到了大島野路菊質(zhì)膜

2、型Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的cDNA全長(zhǎng)序列，命名為CcSOS1。序列分析顯示，CcSOS1全長(zhǎng)3752bp，開放閱讀框（ORF）為3438bp，編碼1145個(gè)氨基酸。疏水性和跨膜分析結(jié)果表明，CcSOS1的N-端高度疏水并含有12個(gè)跨膜區(qū)域，C-端高度親水且全部位于細(xì)胞質(zhì)中。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，CcSOS1與葡萄VvSOS1、番茄S1SOS1和胡楊PeSOS1等的同源性較高，分別為79.11％、77.68％和76.04％。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

3、表明，CcSOS1屬于質(zhì)膜型Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。通過CcSOS1-GFP對(duì)CcSOSl進(jìn)行亞細(xì)胞定位，結(jié)果顯示CcSOS1位于細(xì)胞的質(zhì)膜上。
　　 熒光定量PCR（qRT-PCR）顯示，正常生長(zhǎng)條件下CcSOS1基因在植物的根和葉中均有表達(dá)，且在葉片中的表達(dá)量稍高于根中的表達(dá)量，表明CcSOS1為組成型表達(dá)，且無明顯的組織特異性。NaCl脅迫下，根中CcSOS1的表達(dá)水平在處理1h內(nèi)便達(dá)到頂峰，約為對(duì)照的11倍，表明可顯著

4、提高CcSOS1在植物根中的表達(dá)水平；干旱（20％PEG6000）、低溫（4℃）和ABA等處理也可不同程度地影響CcSOS1的表達(dá)，但具體影響形式互有差異；此外，在NaCl脅迫時(shí)添加外源Ca2+可提高植物根中CcSOS1的表達(dá)水平。
　　 通過插入中間片段在植物表達(dá)載體中添加了新的限制酶酶切位點(diǎn)的方法，成功構(gòu)建CcSOS1基因的植物雙元表達(dá)載體pCAMBIA-1301-220-CcSOS1，為進(jìn)行植物轉(zhuǎn)化并深入研究CcSOS1基