美洲鰣魚GnRH基因的克隆與表達分析.pdf

1、美洲鰣魚(Alosa sapidissima)隸屬于鯡形總目(Clupeomorpha),鯡形目(Clupeiformes),鯡科(Clupeidae)、西鯡屬(Alosa)。美洲鰣魚與中國的鰣魚(Tenualosa reevesii Richardson)不但外形相似，且在生活習性上都很近似，二者均是具有很高營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值的洄游性魚類。目前，在市場上美洲鰣魚可以作為在中國資源奇缺的中國鰣魚的替代品種進行養(yǎng)殖、推廣和食用。促性腺激素

2、釋放激素（GnRH）一種具有高度保守性的十肽類激素，作為脊椎動物神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中關(guān)鍵激素，其在腦-垂體-性腺（BPG）軸中起到重要的調(diào)控作用。
　　本文通過同源克隆與RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技術(shù)獲得了美洲鰣魚3種GnRH全長cDNA，通過生物軟件進行了分析，并利用實時熒光定量PCR技術(shù)對這些基因在不同組織及繁殖時期表達進行了研究:
　?。?）美洲鰣魚GnRH1的cDNA序列

3、全長為462bp，包括一個長258bp的開放閱讀框(ORF)，一個150bp的5’非編碼區(qū)，一個61bp的3’非編碼區(qū)，一個終止密碼子(TGA)，共編碼86個氨基酸，其中信號肽長為22個氨基酸，預測的蛋白分子量為9.52kD，等電點為6.80。
　?。?）美洲鰣魚GnRH2的cDNA序列全長為809bp，包括一個長255bp的開放閱讀框(ORF)，一個224bp的5’非編碼區(qū)，一個327bp的3’非編碼區(qū)，一個終止密碼子(TGA)

4、，共編碼85個氨基酸，其中信號肽長為24個氨基酸，預測的蛋白分子量為9.82kD，等電點為8.66。
　?。?）美洲鰣魚GnRH3的cDNA序列全長為887bp，包括一個長315bp的開放閱讀框(ORF)，一個111bp的5’非編碼區(qū)，一個458bp的3’非編碼區(qū)，一個終止密碼子(TGA)，共編碼105個氨基酸，其中信號肽長為21個氨基酸，預測的蛋白分子量為12.29kD，等電點為8.18。
　　每一種GnRH都包括一個信號

5、肽、一個Gly-Lys-Arg連接序列和一個GnRH相關(guān)肽。分析比較了美洲鰣魚3種GnRH基因的氨基酸序列與其它脊椎動物的同源性。系統(tǒng)進化分析表明美洲鰣魚3種不同分子形式的GnRH分別歸屬于3個不同分支：cGnRH-II分支、sGnRH分支和魚類特異性GnRH分支(如sbGnRH,cfGnRH等)。
　　美洲鰣魚GnRH基因在腦中表達量最高且具有性別特異性表達模式，其中雌性腦中的GnRH mRNA表達水平高于雄性。在周期表達的研究