仔豬多胺代謝相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、為了研究多胺代謝相關(guān)基因在仔豬機(jī)體內(nèi)的作用，本文以斷乳前后仔豬為研究對(duì)象，依據(jù)報(bào)道的人、小鼠和大鼠的相似基因序列對(duì)豬的ESTs庫(kù)和UniGene進(jìn)行搜索并拼接序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RT-PCR，在豬體內(nèi)克隆了以下七種與多胺代謝相關(guān)的基因：精氨酸脫羧酶（Arginine decarboxylase，ADC）；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶（Ornithine decarboxylase，ODC）；鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Ornithine aminotransferase

2、，OAT）；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-1（Ornithine decarboxylase antizyme 1，OAZ1）；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-2（Ornithine decarboxylase antizyme 2，OA22）；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-3（Ornithine decarboxylase antizyme 3，OA23）；多胺調(diào)控因子-1（Polyamine-modulated factor 1，PMF1）。測(cè)定了這7種基因

3、的序列，并分別與人、小鼠和大鼠的相關(guān)基因進(jìn)行了同源性分析。試驗(yàn)采用半定量RT-PCR法，以18S rRNA為內(nèi)標(biāo)，研究仔豬于斷乳前后各組織中這些多胺代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平。主要結(jié)果如下： 豬精氨酸脫羧酶基因：克隆的豬ADC基因片段長(zhǎng)1602 bp，包含一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框架（open reading frame，ORF），全長(zhǎng)1380 bp，推測(cè)蛋白編碼由460個(gè)氨基酸殘基組成。豬ADC基因與人、小鼠的同源性分別為91．1

4、％和87．4％，推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為89．7％和87％。半定量分析顯示，在斷乳前后ADC mRNA在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)量均很低，部分組織幾乎檢測(cè)不到；斷乳后，盲腸和直腸的表達(dá)量有所上升，其它各組織都有所下降。 豬鳥(niǎo)氨酸脫羧酶基因：克隆的豬ODC基因片段長(zhǎng)1422 bp，包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為1383 bp，推測(cè)蛋白編碼由461個(gè)氨基酸殘基組成。豬ODC基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為86．1％、84．8％和84．4％，

5、推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為93．1％、89．8％和90．5％。半定量分析顯示，在斷乳前后ODC mRNA在機(jī)體各組織都有分布，但含量都不高；斷乳后，盲腸和直腸的表達(dá)量有很大上升，空腸、回腸和結(jié)腸的表達(dá)量都有小幅下降。 豬鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨酶基因：克隆的豬OAT基因片段長(zhǎng)1465 bp，包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為1317 bp，推測(cè)蛋白編碼由439個(gè)氨基酸殘基組成。豬OAT基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為87．1％、82．2％和82

6、．2％，推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為91．8％、90．5％和89．8％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAT mRNA在機(jī)體各組織廣泛存在；斷乳后，腎的表達(dá)量有明顯上升，十二指腸、空腸和回腸都有所下降。 豬鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-1基因：克隆的豬OAZ1基因片段長(zhǎng)874 bp，包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為681 bp，推測(cè)蛋白編碼由227個(gè)氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機(jī)制。豬OAZ1基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為92

7、．5％、85．1％和84．3％，推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為93．4％、83．8％和82．5％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ1 mRNA在機(jī)體內(nèi)都有廣泛而豐富的表達(dá)；斷乳后，除了胃，其它組織表達(dá)水平均有所提高。 豬鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-2基因：克隆的豬OA22基因片段長(zhǎng)678 bp，包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為568 bp，推測(cè)蛋白編碼由189個(gè)氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機(jī)制。豬OA22基因與人、小鼠和大鼠的

8、同源性分別為98．1％、97．9％和97．2％，推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為99．5％、98．9％和98．9％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ2 mRNA在機(jī)體內(nèi)都有廣泛而豐富的表達(dá)；斷乳后，所有組織的表達(dá)量都有不同程度上升，尤以盲腸上升幅度最大。 豬鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗酶蛋白-3基因：克隆的豬OA23基因片段長(zhǎng)667 bp，包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為559 bp，推測(cè)蛋白編碼由186個(gè)氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機(jī)

9、制。豬OA23基因與人、小鼠和大鼠的周源性分別為89．6％、85．5％和84．8％，推測(cè)的氨基酸序列同源性分別為90．4％、87．5％和84．2％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ3 mRNA在機(jī)體內(nèi)廣泛分布，個(gè)別組織表達(dá)量低；其在腸道組織的表達(dá)量于斷乳后均有不同幅度上升。 豬多胺調(diào)控因子-1基因：克隆的豬PMF1基因片段長(zhǎng)703 bp．包含一個(gè)完整的ORF，全長(zhǎng)為615 bp，推測(cè)蛋白編碼由205個(gè)氨基酸殘基組成。豬PMF1基